[发明专利]缩短肽链的Exendin4及其基因工程应用

权利要求书

1.一种缩短肽链的Exendin4变体，其特征在于，该Exendin4变体的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。

2.一种编码权利要求1所述的缩短肽链的Exendin4变体的多核苷酸，其特征在于，该多核苷酸的SEQ ID NO:2中第16-117位所示的核苷酸序列。

3.一种重组表达载体，其特征在于，所述的重组表达载体包含权利要求3所述的多核苷酸。

4.如权利要求3所述的重组表达载体，其特征在于，其中包括12拷贝的权利要求3所述的多核苷酸。

5.一种重组宿主细胞，其特征在于，所述的宿主细胞中包含有权利要求3或4所述的重组表达载体，或其基因组中整合有权利要求2所述的多核苷酸；较佳地，整合12拷贝的权利要求2所述的多核苷酸。

6.如权利要求5所述的重组宿主细胞，其特征在于，所述的重组宿主细胞是大肠杆菌细胞；优选地是JM103或JM109。

7.一种重组表达权利要求1所述的缩短肽链的Exendin4变体的方法，其特征在于，所述的方法包括：

培养权利要求5或6所述的重组宿主细胞，从而表达权利要求1所述的缩短肽链的Exendin4变体。

8.如权利要求7所述的方法，其特征在于，培养基含：蛋白胨20g/L，酵母抽提物10g/L，K₂HPO₄·3H₂O12g/L，NaH₂PO₄·3H₂O2g/L，50%甘油7ml/L；

培养条件：37℃，搅拌速度500rpm，PH6.5～7.5，通气量30L/min。发酵过程中不断取液，离心后称重，在Log phase中期加入IPTG，终浓度0.3mM，继续发酵4小时后停止发酵；4000rpm离心收集菌体；

收集的菌体在冷却条件下，利用超声波破碎菌体。离心分离包涵体，再经2M尿素洗涤一次；

之后，用20mM Tris-HCl缓冲液将包涵体溶解；在表达获得的肽为12拷贝的情况下，还包括：按照100g湿重包涵体加1-10mg的比例加入Clostripain，30℃，保温，从而切割为单拷贝的Exendin4变体；

之后，将获得的产物进行制备型HPLC纯化。

9.权利要求1所述的缩短肽链的Exendin4变体的用途，用于制备改善或治疗糖尿病的药物。

10.一种用于改善或治疗糖尿病的药物，其特征在于，所述的药物包括：权利要求1所述的缩短肽链的Exendin4变体，以及药学上可接受的载体。