[发明专利]鉴定小麦粒重基因TaGW2-6B启动子区单元型的方法及其专用标记

权利要求书

1.用于鉴定小麦粒重基因TaGW2-6B启动子区单元型的试剂盒，含有如下（a）-（c）：

（a）引物对1和限制性内切酶BstNI；所述引物对1为由序列表中序列1和序列2所示的两条单链DNA分子组成的引物对；

（b）引物对2和引物对3；所述引物对2为由序列表中序列3和序列4所示的两条单链DNA分子组成的引物对；所述引物对3为由序列表中序列5和序列6所示的两条单链DNA分子组成的引物对；

（c）引物对4和限制性内切酶Hpy166II；所述引物对4为由序列表中序列7和序列8所示的两条单链DNA分子组成的引物对。

2.用于鉴定小麦粒重基因TaGW2-6B启动子区单元型的试剂盒，含有引物对1和限制性内切酶BstNI；所述引物对1为由序列表中序列1和序列2所示的两条单链DNA分子组成的引物对。

3.利用权利要求1所述的试剂盒鉴定小麦粒重基因TaGW2-6B启动子区单元型的方法，包括如下步骤：

（1）如下a1）和a2）：

a1）以待测小麦的基因组DNA为模板，采用所述引物对1进行PCR扩增，得到PCR产物1；再用所述限制性内切酶BstNI酶切所述PCR产物1，得到酶切产物1；

a2）根据步骤a1）所得的酶切产物1，按照如下方法确定所述待测小麦粒重基因TaGW2-6B启动子区单元型：若所得酶切产物1含有1361bp的DNA片段，则所述待测小麦具有或候选具有Hap-6B-1型的小麦粒重基因TaGW2-6B启动子区单元型，鉴定完毕；若所得酶切产物1不含有1361bp的DNA片段，则所述待测小麦不具有或候选不具有Hap-6B-1型的小麦粒重基因TaGW2-6B启动子区单元型，继续如下步骤（2）；

（2）如下b1）和b2）：

b1）以所述待测小麦的基因组DNA为模板，采用所述引物对2和所述引物对3进行PCR扩增，得到PCR产物2；

b2）根据步骤b1）所得的PCR产物2，按照如下方法确定所述待测小麦粒重基因TaGW2-6B启动子区单元型：若所得PCR产物2含有652bp的DNA片段，则所述待测小麦具有或候选具有Hap-6B-2型的小麦粒重基因TaGW2-6B启动子区单元型，鉴定完毕；若所得PCR产物2不含有652bp的DNA片段，则所述待测小麦不具有或候选不具有Hap-6B-2型的小麦粒重基因TaGW2-6B启动子区单元型，继续如下步骤（3）；

（3）如下c1）和c2）：

c1）以所述待测小麦的基因组DNA为模板，采用所述引物对4进行PCR扩增，得到PCR产物3；再用所述限制性内切酶Hpy166II酶切所述PCR产物3，得到酶切产物2；

c2）根据步骤c1）所得的酶切产物2，按照如下方法确定所述待测小麦粒重基因TaGW2-6B启动子区单元型：若所得酶切产物2含有248bp的DNA片段，则所述待测小麦具有或候选具有Hap-6B-3型的小麦粒重基因TaGW2-6B启动子区单元型；若所得酶切产物2含有228bp的DNA片段，则所述待测小麦具有或候选具有Hap-6B-4型的小麦粒重基因TaGW2-6B启动子区单元型。

4.利用权利要求2所述试剂盒鉴定待测小麦是否具有Hap-6B-1型的小麦粒重基因TaGW2-6B启动子区单元型的方法，包括如下步骤：

（A1）以待测小麦的基因组DNA为模板，采用权利要求3中所述引物对1进行PCR扩增，得到PCR产物1；再用限制性内切酶BstNI酶切所述PCR产物1，得到酶切产物1；

（A2）根据步骤（A1）所得的酶切产物1，按照如下方法确定所述待测小麦是否具有Hap-6B-1型的小麦粒重基因TaGW2-6B启动子区单元型：若所得酶切产物1含有1361bp的DNA片段，则所述待测小麦具有或候选具有Hap-6B-1型的小麦粒重基因TaGW2-6B启动子区单元型；若所得酶切产物1不含有1361bp的DNA片段，则所述待测小麦不具有或候选不具有Hap-6B-1型的小麦粒重基因TaGW2-6B启动子区单元型。

5.根据权利要求3或4所述的方法，其特征在于：采用所述引物对1进行PCR扩增的退火温度为64℃；采用所述引物对2进行PCR扩增的退火温度为61℃；采用所述引物对3进行PCR扩增的退火温度为62℃；采用所述引物对4进行PCR扩增的退火温度为63℃。