[发明专利]一种发光底物及应用和含该发光底物的检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明公开了一种发光底物，本发明还公开了该发光底物的应用以及含该发光底物的检测试剂盒。

背景技术

近十年来标记免疫分析技术的研究和应用发展迅速，已广泛应用于生物医学基础理论研究及临床疾病诊断各领域。用于检测血清学指标的方法主要包括放射性同位素免疫分析、酶联免疫吸附法和化学放光免疫分析。

目前，临床领域应用最为广泛的定量免疫检测方法主要是化学发光免疫分析（CLIA），是一种敏感微量免疫测定法，兼有放射免疫（RIA）高灵敏度和酶联免疫（ELISA）易操作等优点，同时又克服了放射免疫和酶联免疫各自的缺点，是临床免疫检测最理想的方法之一。

化学发光免疫分析法根据标记物的不同可分为三大类，即化学发光免疫分析、化学发光酶免疫分析和电化学发光免疫分析。其中以辣根过氧化物酶（HRP）标记的化学发光酶免疫分析(Chemiluminescence Enzyme Immol/Lunoassay，CLEIA)是以HRP标记生物活性物质(如酶标记的抗原或抗体)进行免疫反应，免疫反应复合物上的酶再作用于发光底物，激发化学发光底物产生光信号，利用发光信号测定仪进行发光测定。HRP有许多发光底物，但最常用的发光底物是鲁米诺及其衍生物。在CLEIA中，使用HRP酶标抗体进行免疫反应后，在碱性条件下，HRP和氧化剂(H2O2)作用于发光底物鲁米诺使其发生化学反应进而发光，利用光信号测定仪可以测量这种光信号。但是这种传统的化学发光体系(HRP-H2O2-luminol)存在发光强℃低、不易测量等缺点。后来，研究发现在发光系统中加入增强发光剂，如含有取代基的酚类化合物(如4-(3-噻吩基)酚类化合物)、萘酚、取代的溴酸化合物、乙酰苯胺类化合物等，可以大大增强发光信号，并在较长的时间内保持稳定，便于重复测量，从而提高分析灵敏度和准确性。

原发性肝癌，尤其是肝细胞癌（Hepatocellular Carcinoma），作为世界上最常见的恶性肿瘤之一，也是世界上各种实体肿瘤中预后效果较差的恶性肿瘤之一，并具有与乙肝、肝硬化等密切联系的疾病特点，尤其近年其患病率在我国呈逐年上升趋势。因此，肝癌的早期预警技术研究对于预防肝癌、预测肝癌的发病趋势具有非常重要的研究价值和社会意义。目前临床上广泛应用的肝癌诊断标志物AFP，但是对于早期肝癌的诊断，其敏感性、特异性均不理想。因此在临床上希望获得比甲胎蛋白特异性和灵敏度更高的新血清学指标，或者能够与AFP进行互补的指标。其中高尔基体蛋白73（GolgiProtein73，GP73）GP73是近年研究发现的最有可能成为更好的肝癌诊断尤其是早期肝癌诊断的血清标志物。对于早期肝癌（T1：单个结节，直径<2cm及T2：单个结节，直径位于2cm～5cm之间或者小于三个结节，每个直径<3cm）的诊断，GP73的敏感性显著优于AFP，而且AFP水平低于20μg/L的HCC患者中，多达57％的人群GP73水平显著升高，这表明HCC患者GP73水平显著升高，因此对于早期肝癌的诊断，GP73优于AFP。

发明内容

针对上述问题，本发明的目的在于提供一种高灵敏度、高稳定性的化学发光底物，并且提供了该发光底物的用途以及含有该发光底物的试剂盒，该试剂盒使用方便，灵敏度高。

为解决上述技术问题，本发明提供的前一技术方案是这样的：该发光底物由A、B液组成，所述的A液包含下述组分：0.5～8mmol/L鲁米诺、0.5～10mmol/L对碘苯酚、0.1mol/L Tris-HCl缓冲液；所述的B液包含下述组分：1～10mmol/L过氧化脲、0.1mol/L Tris-HCl缓冲液。

更优的，上述的发光底物，所述的A液包含下述组分：2.5mmol/L鲁米诺、3.0mmol/L对碘苯酚、0.1mol/L Tris-HCl；所述的B液包含下述组分：1.3mmol/L过氧化、0.1mol/L Tris-HCl。

进一步的，上述的发光底物，所述的Tris-HCll缓冲液的pH值是8.5。

进一步的，上述的发光底物，所述的Tris-HCl缓冲液包括下述质量百分比的组分：0.05～0.3%BSA、0.01～0.05%Tween-20、0.01～0.1%proclin300，用HCl调节pH至8.5。

本发明的另外一个技术方案是该发光底物作为制备ELISA定量检测试剂盒的应用。