[发明专利]利用毕赤酵母生产重组几丁质酶的方法在审
| 申请号： | 201310621118.1 | 申请日： | 2013-11-29 |
| 公开（公告）号： | CN103627688A | 公开（公告）日： | 2014-03-12 |
| 发明（设计）人： | 段升华 | 申请（专利权）人： | 中山奈德生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N9/42 | 分类号： | C12N9/42;C12R1/84 |
| 代理公司： | 中山市铭洋专利商标事务所(普通合伙) 44286 | 代理人： | 邹常友 |
| 地址： | 528403 广东省中山市火*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 利用 酵母 生产 重组 几丁质 方法 | ||
【权利要求书】：
1.利用毕赤酵母生产重组几丁质酶的方法，其特征在于：包括如下步骤：
（1）菌种选择；
（2）培养基的制备；
（3）发酵培养；
（4）粗酶液的制备；
（5）几丁质酶活力测定。
2.根据权利要求1所述利用毕赤酵母生产重组几丁质酶的方法，其特征在于：所述步骤（1）选用的菌种为P.pastoris GS115菌株，遗传表型Mut+，醇氧化酶启动子为AOxl,构建载体。
3.根据权利要求1所述利用毕赤酵母生产重组几丁质酶的方法，其特征在于：所述步骤（2）中的培养基包括YPD、BMGY、BMMY和斜面培养基。
4.根据权利要求1所述利用毕赤酵母生产重组几丁质酶的方法，其特征在于：所述步骤（3）发酵培养步骤为：于30℃生长2d的新鲜平板上取两环单菌落接到种子培养基中摇瓶培养约18h，再以10％的接种量转接到BMGY中培养24h，离心弃上清液，菌体转接到BMMY开始诱导，每隔12h补加甲醇至预设浓度，摇床温度为30℃，转速200r/min，装液量为30mL/150mL。
5.根据权利要求1所述利用毕赤酵母生产重组几丁质酶的方法，其特征在于：所述步骤（4）粗酶的制备是将发酵液在4℃条件下15000r/min离心15min，上清液即为粗酶液。
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