[发明专利]一种键合多糖型亲水色谱固定相及其制备方法与应用

权利要求书

1.一种键合多糖型亲水色谱固定相，其特征在于，其化学结构式：

其中SiO₂为硅胶，saccharide为聚糖，n为大于1的自然数。

2.一种键合多糖型亲水色谱固定相的制备方法，其特征在于，其具体步骤为：

(1)硅胶预处理

硅胶加入质量分数为1～40％的盐酸或硝酸溶液中，加热回流搅拌1～48小时，过滤，水洗至中性，于100～160℃下干燥至恒重；得到活化硅胶；

(2)硅胶表面修饰

将步骤(1)制得的活化硅胶置于玻璃或者聚四氟乙烯反应容器中，在氮气氛围下加入有机溶剂，搅拌均匀，滴加硅烷试剂，保持温度为20～200℃条件下搅拌2～48小时；待反应体系冷却至室温，减压过滤并用甲苯，丙酮，甲醇水，甲醇洗涤，固体产品在60～100℃条件下干燥12～36小时；得到固体产物；

(3)键合连接臂过程

将步骤(2)所得固体产物加入到含有羰基二咪唑的无水二氧六环溶液的混合溶液中，搅拌均匀，保持温度为10～40℃条件下搅拌1～24小时；反应结束后减压过滤并用无水二氧六环溶液洗涤，固体产品在60～100℃条件下干燥12～36小时；得到中间产物；

(4)键合聚糖过程

将步骤(3)所得中间产物与聚糖水溶液混合，搅拌均匀，保持温度为10～100℃条件下搅拌1～120分钟。反应结束后减压过滤并用水洗涤，固体产品在60～100℃条件下干燥12～36小时；得到最终的产物键合多糖型亲水色谱固定相。

3.如权利要求2所述的一种键合多糖型亲水色谱固定相的制备方法，其特征在于，在所述步骤(2)中，所述的有机溶剂为与水不互溶的有机溶剂，包括甲苯，乙苯，二甲苯，正己烷，正庚烷，正戊烷，正辛烷、环己烷等苯系物和烷烃。

4.如权利要求2所述的一种键合多糖型亲水色谱固定相的制备方法，其特征在于，在所述步骤(2)中，所述的有机溶剂的使用量为每克活化硅胶使用2～100mL有机溶剂。

5.如权利要求2所述的一种键合多糖型亲水色谱固定相的制备方法，其特征在于，在所述步骤(2)中，所述的硅烷试剂结构式为：

其中，X为-OCH₃，-OCH₂CH₃或-Cl，m=1～12，A为NH₂。

6.如权利要求2所述的一种键合多糖型亲水色谱固定相的制备方法，其特征在于，在所述步骤(2)中，所述的硅烷试剂的使用量为每克活化硅胶使用0.5～5mmol。

7.如权利要求2所述的一种键合多糖型亲水色谱固定相的制备方法，其特征在于，在所述步骤(3)中，所述的混合溶液的使用量为每克硅胶使用0.1～1g羰基二咪唑，1～100mL无水二氧六环溶液。

8.如权利要求2所述的一种键合多糖型亲水色谱固定相的制备方法，其特征在于，在所述步骤(4)中，所述的聚糖包括葡聚糖，环糊精，琼脂糖，分子量范围在几百到几万之间。

9.如权利要求2所述的一种键合多糖型亲水色谱固定相的制备方法，其特征在于，在所述步骤(4)中，所述的聚糖的使用量为每克硅胶使用0.01～1g，所配置的水溶液质量浓度为0.1～10％。

10.一种键合多糖型亲水色谱固定相在糖的分离和修饰糖蛋白组学中的应用。