[发明专利]产水解酶的黑曲霉及其在制备香菇酶解物中的应用

说明书

（一）技术领域

本发明涉及一株产水解酶的黑曲霉（Aspergullis niger）MJ及其在制备香菇酶解物中的应用。

（二）背景技术

香菇，又名香蕈、香菌、冬菇、厚菇或花菇等，为担子菌纲伞菌目侧耳科香菇属的香蕈（Lentinula edodes）的子实体。香菇是世界第二大食用菌，也是我国特产之一，在民间素有“山珍”之称。香菇肉质肥厚细嫩、味道鲜美、香气沁人、营养丰富，是我国人民餐桌上传统的美味菜肴，具有低脂肪、富含维生素和矿物元素等特点，是一种可增强人体免疫力的健康食品。

香菇不仅是人们理想的美味佳肴，而且具有良好的保健功能和较高的药用价值。经常食用香菇可预防缺乏维生素D而引起的血磷、血钙代谢障碍导致的佝偻病，可预防人体各种粘膜及皮肤炎类疾病。从香菇中提取的多糖，具有健胃保肝、降血糖、降血脂、提高免疫力、抗肿瘤、抗病毒和抗感染等活性，临床应用于治疗慢性病毒性肝炎和癌症的辅助治疗等，药品有香菇多糖片和胶囊、香菇多糖注射液等。

香菇作为中国传统的食用菌，味道鲜营养高，深受人们喜爱。目前各种香菇深加工产品品种已有很多，如香菇罐头、香菇片、香菇精、香菇饮料和香菇米酒等，这些产品主要针对的是香菇的风味和营养价值，但针对香菇的药用和保健功效，仍有进一步开发的余地，以更好地满足市场的需求。

已有研究表明，香菇酶解物可以提高小鼠的免疫功能，改善肠道菌群环境，对肠道功能有一定的调节作用，具有较高的药用和保健功效。已有文献和专利报道采用蛋白酶、纤维素酶和5′-磷酸二酯酶等酶复合水解香菇制备酶解物的报道，这些方法虽然具有水解度高的优点，但是水解需要3种商品酶制剂，生产的成本较高，实际应用难度大。

（三）发明内容

本发明目的是提供一株水解酶产生菌——黑曲霉（Aspergullis niger）MJ，及其在制备香菇酶解物中的应用。利用该菌株发酵制备含蛋白酶、5′-磷酸二酯酶和多糖水解酶等酶的复合水解酶系，直接用于酶解香菇得到酶解物，水解率高达35%以上，酶解物中的氨基酸含量达5.36%，5′-核苷酸含量达0.86%，多糖含量达74.2%。产品味道鲜美，营养丰富，保健功效高，可进一步深加工为香菇调味品或保健食品。

本发明采用的技术方案是：

一株黑曲霉（Aspergullus niger）MJ，保藏于中国典型培养物保藏中心，地址：中国，武汉，武汉大学，邮编：430072，保藏编号：CCTCC NO：M2013329，保藏日期：2013年7月11日。

本发明所述黑曲霉MJ由土壤中分离和筛选，并经过诱变选育得到的优良菌株。

所述黑曲霉MJ的生长特征如下：在马铃薯固体培养基上，30℃条件下，培养3天，菌丝即可长满，并产生大量孢子。菌丝初期为白色绒毛状，之后逐渐呈黑褐色，菌落背面呈浅黄色。菌丝表层有大量黑褐色分生孢子。显微镜下观察到分生孢子头呈黑褐色放射状，分生孢子梗长短不一，顶囊球形，双层小梗，分生孢子黑褐色球形。

本发明还涉及所述的黑曲霉MJ在微生物发酵制备水解酶中的应用。

具体的，所述应用为：将黑曲霉MJ菌种接种至产酶培养基中，25～32℃培养2～4天，获得含有蛋白酶、5′-磷酸二脂酶和多糖水解酶的发酵液。所得发酵液经离心或过滤除去菌体的清液为水解酶的粗酶液，可以直接应用于酶解制备香菇酶解物；也可以保藏于4℃冰箱15天内使用；也可以经过冷冻干燥，制成干酶粉保藏于4℃冰箱长期使用。

所述产酶培养基按如下组成配制：马铃薯100～300g（煮沸20min过滤留汁液），蔗糖20～60g，水补足至1000mL，pH4～6。

本发明还涉及所述的黑曲霉MJ在微生物酶解香菇制备香菇酶解物中的应用。

具体的，所述应用为：将黑曲霉MJ菌种接种至产酶培养基中，25～32℃培养2～4天，发酵液经固液分离获得水解酶的粗酶液。粗酶液经过1～2倍体积的水稀释或不经稀释，加入足量干香菇粉（过量也可），于25～35℃、100～300r/min条件下酶解8～16h，之后，过滤去除未被酶解的香菇残渣，滤液经浓缩、干燥和粉碎，即得香菇酶解物。

所述产酶培养基按如下组成配制：马铃薯100～300g（煮沸20min过滤留汁液），蔗糖20～60g，水补足至1000mL，pH4～6。

所述菌株在产酶培养前，通常需要先经斜面培养基活化培养，或再经过种子扩大培养，然后用孢子或种子液接入产酶培养基进行产酶发酵。具体的，所述活化及种子培养和产酶发酵方法如下：