[发明专利]一种利用苯酚-硫酸测定多糖的方法

权利要求书

1.一种利用苯酚-硫酸测定多糖的方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)多糖标准曲线的测定：称取0.1g的葡萄糖溶于蒸馏水中，并移至100mL的容量瓶中，配置100μg/L的葡萄糖标准液溶液；在螺口试管中分别加入0.00、0.10、0.20、0.40、0.60、0.80、1.00、1.20mL葡萄糖溶液，加水稀释到2mL；添加质量百分比浓度为98%的浓硫酸5.0ml，加盖，震荡5-10次，冷却至常温；去盖，添加质量百分比浓度为5%的苯酚溶液1ml，立即漩涡振荡器摇匀，加盖后于100℃加热15min；冷却至常温，然后空显色5-8min；用分光光度计在λ=490nm测定吸光度；从测得的吸光度，减去零浓度空白管的吸光度后，获得校正吸光度，绘制以多糖含量为校正吸光度的标准曲线；

2)污泥的预处理：取10ml-50ml污泥样品于离心管中；配平，在室温下以8000r/min离心机离心15min；倒掉上清液，加入磷酸盐缓冲溶液，其中磷酸缓冲液为0.05mol/L Na₃PO₄和0.15mol/L NaCl，pH=7，将污泥稀释至原体积，之后将污泥摇散后超声处理3min；

3)多糖的提取：将预处理的污泥放在80℃水浴30min，每隔10min将污泥摇匀一次；冷却至常温后配平，最后在5000-8000r/min离心机离心15min，取上清液测定；

4)多糖的测定：取一定体积待测溶液于螺口试管中，加水使成2ml；添加质量百分比浓度为98%的浓硫酸5.0ml，加盖，震荡5-10次，冷却至常温；去盖，添加质量百分比浓度为5%苯酚溶液1ml，加盖立即漩涡振荡器摇匀，然后于100℃加热15min；冷却至常温，最后显色5-8min；另取2ml蒸馏水同法操作加入试剂做空白对照；用分光光度计在λ=490nm测定吸光度；最后经空白校正后，从标准曲线上查得相应的多糖的含量。