[发明专利]一种疏血通注射液的生物学质控方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种疏血通注射液的生物学质控方法，利用纤维蛋白原和凝血酶模型、运用紫外法建立一种体外快速评价疏血通注射液抗凝血酶活性的方法，属于药品技术的领域。

背景技术

疏血通注射液是水蛭和地龙为原料制成的中药注射液，活血化瘀，通经活络；用于瘀血阻络所致的中风中经络急性期，症见半身不遂，口舌歪斜、言语蹇涩；急性脑梗塞见上述证候者；具有抗栓、溶栓、改善血液循环的作用。授权公告号CN1192782C，公告日2005年3月16日，发明名称“治疗心脑血管疾病的注射剂的制造方法及其产品”的发明专利公开了该中药注射剂及其制备方法。

疏血通注射液属抗凝药物，具有抗凝血酶活性；但目前尚缺乏一种快速、有效的生物学质控方法。现有抗凝血酶活性的评价测定方法包括凝血酶滴定法(目测法)、APTT(活化部分凝血活酶)试剂盒和PT(凝血酶原时间)试剂盒法等。但凝血酶滴定法(目测法)由于检验人眼睛对凝固终点判定的标准各不相同，存在一定的人为差异，对测定结果的准确性带来影响；而APTT试剂盒和PT试剂盒法成本高、操作复杂、易受血液性质影响。因此，为疏血通注射液找到一种既精确灵敏又快速经济的抗凝血酶活性评价方法作为其生物学质控方法势在必行。

发明内容

本发明的目的在于提供一种疏血通注射液的生物学质控方法，该方法利用纤维蛋白原和凝血酶模型、运用紫外法建立一种体外快速评价疏血通注射液抗凝血酶活性的方法。

为了实现本发明目的，本发明采用如下技术方案和步骤实现：

1、打开紫外分光光度计，使样品室温度恒定在37℃，备用；

2、取1只石英比色皿，加入2.0mg／ml纤维蛋白原溶液450μl、疏血通注射液10μl、生理盐水540μl，加塞(盖)摇匀，置样品室恒温支架上预热，作为参比溶液；

3、另取1只石英比色皿，加入2.0mg／ml纤维蛋白原溶液450μl、疏血通注射液10μl、生理盐水440μl，加塞(盖)后置样品室恒温支架上预热，打开塞(盖)，加入12U／ml凝血酶溶液100μl，迅速加塞(盖)摇匀并立刻计时；

4、运用紫外可见分光光度计，选择测定波长250nm，于37℃测得酶促反应动力学曲线，记录达到吸光度为1.00时的反应时间，作为疏血通注射液样品反应物的初凝时间；

5、以读取的疏血通注射液样品反应物的初凝时间与55秒(未加疏血通空白样品的初凝时间)作比较，来评价疏血通注射液的抗凝血酶活性(初凝时间越长，其抗凝血酶活性越强)；拟定疏血通注射液的反应物初凝时间不低于80秒。

本发明的优点为：本发明提供了一种疏血通注射液的生物学质控方法，利用纤维蛋白原和凝血酶模型、运用紫外法建立了体外快速评价疏血通注射液抗凝血酶活性的方法。疏血通注射液在测试时取样量少，无需进行浓缩、稀释等样品前处理，所用的分光光度计为实验室常规仪器，且过程简单，易于操作。本发明建立的方法有较高的精确性和较好的稳定性，且成本较低；克服了凝血酶滴定法(目测法)存在凝固终点判定的人为差异、APTT(活化部分凝血活酶)试剂盒和PT(凝血酶原时间)试剂盒法成本高、操作复杂、易受血液性质影响等现有抗凝血酶活性评价测定方法的缺陷。本发明提供的生物学质控方法，有助于提高疏血通注射液的质量可控性，保障产品的临床疗效。

附图说明

图1目测法测定不同浓度凝血酶与1.00mg／ml纤维蛋白原(未添加疏血通注射液)的凝血酶活性检测标准曲线

图2纤维蛋白原溶液全波长扫描图(190～800nm)

图3凝血酶溶液全波长扫描图(190～800nm)

图4纤维蛋白原和疏血通混合液全波长扫描图(190～800nm)

图5未加疏血通注射液的酶促反应动力学曲线

图6加入疏血通注射液的酶促反应动力学曲线

图7加疏血通注射液与未加疏血通注射液的酶促反应动力学曲线比较(叠加)图

图8紫外法测定不同浓度凝血酶溶液的凝血酶活性检测标准曲线

具体实施方式

为了更好地说明本发明，下面通过实施例予以进一步阐释，但不构成对本发明的限制。

以下实施例中所用到的相关试验仪器及试药如下：