[发明专利]雌三醇的分析方法

说明书

技术领域

本发明涉及药物的分析方法，具体涉及雌三醇的分析方法。

背景技术

雌三醇的制备方法专利较多，但是由于雌三醇制备过程中引入过多杂质，给纯化带来了困难，其中最主要的杂质为雌三醇的异构体(杂质E)。

欧洲药典(EP7.2)采用高效液相色谱法(正相色谱系统)，但该方法不能使雌三醇粗品中各有关物质获得有效分离，影响质量控制；色谱峰峰形差，峰展宽严重；影响对产品质量控制；正相色谱系统耐用性差，使用起来不方便；正相色谱柱使用寿命短，且色谱柱和流动相试剂军较反相昂贵，检测成本高。

美国药典(USP35-NF30)采用薄层色谱法，但该方法灵敏度低；准确度低；不能对各有关物质含量进行定量测定，仅能作为限度检查。

英国药典(BP2012)采用反相色谱法，等度洗脱。其色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱(25cm×4.6mm，5μm)，柱温为35℃，流动相为甲醇：乙腈：水(5：38：57)。该方法中雌三醇及16-表-雌三醇(杂质E)的保留时间分别为约5分钟和7分钟。采用该方法对雌三醇进行分析，雌三醇的峰与相邻杂质峰(杂质E的峰)不能良好分离(见附图1)。

发明内容

为了解决现有技术中雌三醇分析方法的问题，本发明提供一种采用亲水性较好的反相色谱柱，且采用梯度洗脱的方法分离雌三醇与杂志，本发明的方法适用于有较多杂质的雌三醇粗品的分析方法。

实现本发明的技术方案为：

雌三醇的分析方法，采用亲水性反相色谱柱，流动相为：乙腈和水，洗脱方法：梯度洗脱。

所述亲水性反相色谱柱为亲水性十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱。

流动相为：乙基和水。

梯度洗脱：乙腈与水的体积比例为：0-10分钟时，10-40：90-60；10-30分钟时，20-80：80-20；30-55分钟时，60-80：40-20。

优选的梯度洗脱：乙腈与水的体积比例为：0-10分钟时，25：75；10-30分钟时，25-70：75-30；30-55分钟时，70：30。

本发明的分析方法中反相色谱柱的柱温为30℃。

本发明的雌三醇分析方法包括如下步骤：

1)溶液配制：精密称取雌三醇粗品，置容量瓶中，用甲醇稀释并定容，摇匀即得。

2)色谱条件：亲水性十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱(5um，4.6×250mm)，流动相为乙腈-水，流速：1.0ml／min，柱温：30℃，检测波长：280nm，进样量为20ul。

3)梯度洗脱：乙腈与水的体积比例为：0-10分钟时，10-40：90-60；10-30分钟时，20-80：80-20；30-55分钟时，60-80：40-20。

本发明的有益效果为：

1、与薄层色谱法比较，本发明的方法可实现对雌三醇粗品的定量测定，能有效控制雌三醇粗品中有关物质的含量，远远优于美国药典的薄层色谱法。

2、与正相高效液相色谱法相比较，针对同一批样品的测定，本方法能检测到的杂质数目更多，主峰及各有关物质的峰形均更好，主峰及相邻杂质峰，各杂质峰之间均能获得良好分离；该法的灵敏度更高，分离度和准确度均更佳，且本法较正相色谱法的检测成本低，明显优于欧洲药典的正相色谱法，更加适用于雌三醇粗品含量和有关物质检测。

3、与一般的反相色谱法比较，本方法采用亲水性能较好的色谱柱，辅之以梯度洗脱方法，能对雌三醇粗品中的有关物质进行更好的分离，较一般的反相色谱分析方法更优(见附图2)。

附图说明

附图1：按照英国药典(BP2012)的反相色谱法分析雌三醇粗品的色谱图

附图2：按照本发明的方法分析雌三醇粗品的色谱图

具体实施方式

实施例1

溶液配制：精密称取雌三醇粗品20mg，置20ml量瓶中，用甲醇稀释并定容，摇匀即得。

色谱条件：亲水性十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱(5um，4.6×250mm)，流动相为乙腈-水，流速：1.0ml／min，柱温：30℃，检测波长：280nm，进样量为20ul。

梯度洗脱：乙腈与水的体积比例为：0-10分钟时，10-20：90-80；10-30分钟时，60-80：40-20；30-55分钟时，60-70：40-30。

实施例2

溶液配制：精密称取雌三醇粗品20mg，置20ml量瓶中，用甲醇稀释并定容，摇匀即得。