[发明专利]骨髓细胞培养基

说明书

本发明公开了一种医学检验领域中用于染色体核型分析的骨髓细胞培养基配方，其在基础培养基中添加了青霉素/链霉素、胎牛血清和人类淋巴瘤细胞培养物。利用本发明的培养基制备出的骨髓细胞制作出的染色体G带，背景更加清晰，分裂相更多，形态及分散度更加良好，便于分析。此种配方用于骨髓染色体核型分析时，具有省时、省力的优势，且准确性更高，在医学检验领域具有更广泛的应用前景。

技术领域

本发明属生物技术领域，特别涉及医学检验领域中用于染色体核型分析的骨髓细胞培养基配方。

背景技术

G显带因为染色体主要是被Giemsa染料染色后而显带，故称之为G显带技术，其所显示的带纹分布在整个染色体上。人们将用各种不同的方法，以及用不同的染料处理染色体标本后，使每条染色体上出现明暗相间，或深浅不同带纹的技术称为显带技术（bandingtechnique）。本世纪70年代以来，显带技术得到了很大发展，且在众多的显带技术中（Q带、G带、C带、R带、T带），G带是目前被广泛应用的一种带型。

研究发现，人染色体标本经胰蛋白酶、Na0H、柠檬酸盐或尿素等试剂处理后，再用Giemsa染色，可使每条染色体上显示出深浅交替的横纹，这就是染色体的G带。每条染色体都有其较为恒定的带纹特征，所以G显带后，可以较为准确的识别每条染色体，并可发现染色体上较细微的结构畸变。

近年来，随着分子生物学与细胞遗传学的发展，骨髓染色体核型分析在血液系统疾病的诊断、治疗和预后中发挥了越来越重要的作用。骨髓染色体的制备因骨髓中有大量脂肪颗粒的干扰, 骨髓中各种细胞系的细胞周期不固定, 不统一, 难以区别对待而使得骨髓染色体分裂指数低, 染色体短粗, 分散度差，且成本较高。

因此，建立一种具有背景更加清晰、分裂相多、形态及分散度良好等特征的骨髓培养基配方尤为重要。

发明内容

本发明的目的是克服现有技术的缺陷，提供一种骨髓细胞培养基，其在基础培养基中添加了青霉素/链霉素、胎牛血清和人类淋巴瘤细胞培养物；

基础培养基：RPMI1640培养基

所述各添加成分的用量如下：

青霉素/链霉素 5-15ul/ml

胎牛血清 60-140 ul/ml

人类淋巴瘤细胞培养物 60-140 ul/ml

进一步地，青霉素选自10000U/ml，链霉素选自10000μg/ml。

进一步地，人类淋巴瘤细胞培养物由以下方法制取：细胞复苏和传代，当传代细胞培养基颜色变为黄色时，收集细胞并离心，离心后，收集上清并过滤得细胞培养物。

进一步地，所述各添加成分用量如下：

青霉素/链霉素 8ul/ml

胎牛血清 96ul/ml

人类淋巴瘤细胞培养物 96ul/ml

本发明还提供了骨髓细胞培养基在骨髓染色体制片中的应用，将骨髓细胞以1～3×10⁶个/ml的密度接种到所述的骨髓培养基中，放入37℃，5.0%CO₂培养箱培养24小时。