[发明专利]一种用于检测鸡显性白羽位点基因型的引物、试剂盒及检测方法

说明书

技术领域

本发明具体涉及一种用于检测鸡显性白羽位点基因型的引物，以及包含该引物的试剂盒及检测方法，属于生物技术领域。

背景技术

随着城市卫生的规范管理和环境控制要求的严格，大中城市农贸市场活禽销售量将逐渐减少，白条鸡和分割鸡形式上市的肉鸡产品份额将不断增加。对于冷鲜鸡市场来说，有色羽肉鸡常因屠宰后羽毛不容易脱干净而影响屠体的美观，所以显性白羽鸡在品种的培育中具有重要意义。

白羽鸡从基因型上可以分为纯合显性白羽、杂合显性白羽和隐性白羽三种类型。我们在显性白羽鸡的育种中需要选育出纯合显性白羽基因型，来满足的育种需求。因此利用分子生物手段来诊断某个体在显性白羽位点的基因型，这对我们育种来说是非常重要和必要的。

显性白羽基因座是影响鸡羽色形成的最重要基因座位之一，其座位上的显性等位基因I会阻碍羽毛黑色素合成，从而使携带此基因型的个体全身羽毛呈现白色。目前已确认显性白等位基因是由于PMEL17基因第10外显子9bp插入造成的。即显性等位基因I是PMEL17基因第10外显子含9bp插入基因型，隐性等位基因i是PMEL17基因第10外显子无9bp插入基因型。对于只差9bp的基因片段来说，常规PCR扩增后琼脂糖凝胶电泳很难分型。近年来，人们发展了许多用于探寻分子遗传标记的方法，最常见的有单链构象多态技术（SSCP）、PCR-RFLP和直接测序技术等，但SSCP操作繁琐、耗时长，结果易造成误判；而直接测序技术成本较高。

发明内容

本发明的目的是提供一种用于检测鸡显性白羽位点基因型的引物。

同时，本发明还提供一种用于检测鸡显性白羽位点基因型的试剂盒。

最后，本发明还提供一种检测鸡显性白羽位点基因型的方法。

为了实现以上目的，本发明所采用的技术方案是：

一种用于检测鸡显性白羽位点基因型的引物，包括引物对P：

上游引物P-F：5’-AGTGGCACCACGCTCACCGTGGGGCAGCT-3’（如SEQ ID No.1所示）；

下游引物P-R：5’-GAGGGGGTGAGTGCTGTGTTCTC-3’（如SEQ ID No.2所示）。

一种用于检测鸡显性白羽位点基因型的试剂盒，主要包括引物对P：

上游引物P-F：5’-AGTGGCACCACGCTCACCGTGGGGCAGCT-3’；

下游引物P-R：5’-GAGGGGGTGAGTGCTGTGTTCTC-3’。

优选的，一种用于检测鸡显性白羽位点基因型的试剂盒，还包括2×Taq PCR MasterMix、灭菌超纯水，以及包含600bp、500bp、400bp、300bp、200bp和100bp的DNA Marker。

所述的2×Taq PCR MasterMix含有Taq DNA聚合酶、dNTPs、氯化镁和PCR反应缓冲液，为市售商品，可购自上海生工、大连宝生物、北京百泰克、北京康为等公司。

一种检测鸡显性白羽位点基因型的方法，包括以下步骤：

（1）以包含PMEL17基因的待测鸡全基因组DNA为模板，以引物对P为引物PCR扩增PMEL17基因第十外显子，得到扩增片段；

（2）对扩增片段进行PvuⅡ酶切，对酶切产物进行琼脂糖凝胶电泳，根据琼脂糖凝胶电泳结果鉴定鸡显性白羽位点的基因型。

所述步骤（1）中鸡全基因组DNA采用苯酚-氯仿粗提法或蛋白酶K法提取。

所述步骤（1）中PCR扩增反应体系为：2×Taq PCR MasterMix6.25μL，ddH₂O4.25μL，P-F0.5μL，P-R0.5μL，DNA模板1.0μL。

所述步骤（1）中PCR扩增反应程序为：95℃预变性5min；95℃变性30s，60℃退火30s，72℃延伸20s，30个循环；72℃延伸10min；4℃保存。

所述步骤（2）中PvuⅡ酶切反应体系为：步骤（1）的扩增片段10μL，Buffer1.5μL，PvuⅡ0.3μL，ddH₂O3.2μL。

所述步骤（2）中PvuⅡ酶切反应条件为：37℃，酶切过夜。

所述步骤（2）中琼脂糖凝胶的质量浓度为2%。

所述步骤（2）中琼脂糖凝胶电泳的电压为120V，电泳时间为60min。