[发明专利]抗冻蛋白及从谷朊粉中提取抗冻蛋白的方法有效
| 申请号： | 201310589169.0 | 申请日： | 2013-11-20 |
| 公开（公告）号： | CN103613650B | 公开（公告）日： | 2016-10-12 |
| 发明（设计）人： | 刘爱国;赵源;吴子健 | 申请（专利权）人： | 天津商业大学 |
| 主分类号： | C07K14/415 | 分类号： | C07K14/415;C07K1/14 |
| 代理公司： | 天津市三利专利商标代理有限公司 12107 | 代理人： | 肖莉丽 |
| 地址： | 300134*** | 国省代码： | 天津;12 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 蛋白 谷朊粉中 提取 方法 | ||
1.一种抗冻蛋白，其特征在于，所述抗冻蛋白的分子量为43.14KDa，经差示扫描量热仪测定的热滞活性为0.08℃，采用下述方法制备：以谷朊粉为原料，经碱性溶液浸提后离心、透析除盐、冷冻干燥得到抗冻蛋白粗品；所述碱性溶液的浓度为0.01-0.09mol/L、pH值为8-11。
2.一种从谷朊粉中提取权利要求1所述的抗冻蛋白的方法，其特征在于，包括下述步骤：以谷朊粉为原料，以碱性溶液作为浸提液浸提，再经离心、透析和冷冻干燥得到抗冻蛋白粗品；所述碱性溶液的浓度为0.01-0.09mol/L、pH值为8-11。
3.根据权利要求2所述的从谷朊粉中提取抗冻蛋白的方法，其特征在于，所述碱性溶液为NaOH溶液。
4.根据权利要求2或3所述的从谷朊粉中提取抗冻蛋白的方法，其特征在于，浸提的温度为10-55℃。
5.根据权利要求4所述的从谷朊粉中提取抗冻蛋白的方法，其特征在于，浸提的提取时间为1-4h。
6.根据权利要求2或3所述的从谷朊粉中提取抗冻蛋白的方法，其特征在于，所得抗冻蛋白粗品经分离纯化得到高纯度的抗冻蛋白；所述抗冻蛋白粗品分离纯化的手段为凝胶层析。
7.根据权利要求6所述的从谷朊粉中提取抗冻蛋白的方法，其特征在于，抗冻蛋白粗品分离纯化的具体工艺为：浸提的抗冻蛋白粗品利用SepHadex G-100凝胶色谱进行分离，一次上样量为100-300μL，洗脱液为含0.1-0.2mol/L的NaCl、浓度为5-15mmol/L、pH值为8-9的Tris-HcL缓冲液，流速为0.1-0.3ml/min，在检测波长为280nm的条件下收集洗脱峰，即可得到高纯度的抗冻蛋白。
8.根据权利要求4所述的从谷朊粉中提取抗冻蛋白的方法，其特征在于，所述离心的条件为：4-10℃下以6000-10000r/min的速率离心10-30min。
9.根据权利要求4所述的从谷朊粉中提取抗冻蛋白的方法，其特征在于，谷朊粉的质量浓度为3-10%。
10.权利要求1所述的抗冻蛋白在农业、医学、生物技术和食品领域的抗冻方面的应用。
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