[发明专利]一种用于裂解红细胞的组合物、红细胞裂解试剂及应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种用于裂解红细胞的组合物、红细胞裂解试剂及应用，属于生物材料技术领域。

背景技术

血液和造血组织中的细胞与功能分子是血液学、生物化学、细胞生物学、分子生物学等领域的主要研究对象。近些年来，随着基础科学的飞速发展和实验技术的日新月异，这些领域的研究内容和范畴不断地深入与扩大，为临床诊断水平的提高奠定了坚实基础。其中，以流式细胞术（Flow Cytometry Method,FCM）、实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-Time Fluorescence Quantitative Polymerase Chain Reaction,RT-PCR）、荧光原位杂交（Fluorescence in situ Hybridization,FISH）为代表的一系列先进技术，已逐渐成为实验室检测，以及临床诊断中不可或缺的重要技术手段之一，发挥着血液分析仪等常规诊断设备无法实现的、更为精准的检测用途。

FCM技术在免疫功能评价、血液肿瘤的诊断与分型、治疗方案选择与预后判断、药物敏感性筛选和发病机理研究等方面都发挥着重要作用；特别是干细胞研究及临床应用中，FCM检测与监测CD34+细胞群比例是最为常规和必需的技术手段。RT-PCR技术则在基因水平对机体病毒感染实现了高灵敏度和高特异性的体外筛查。FISH技术不仅可用于已知基因或序列的染色体定位，还可用于未克隆基因或遗传标记及染色体畸变的研究，在基因定性、定量、整合、表达等方面的研究中具有明显优势。这些高新技术在为实验室和临床提供重要参数的同时，其自身作为检测方法的准确性，特别是其在诊断应用中的质量控制成为了关键环节。卫生部临床检验中心专家在《分子诊断质量控制面临的问题》（胡丽涛等，临床检验杂志，2012，30(6):466-467）一文中详细阐释了这一问题。此外，美国病理学家学会（College of American Pathologists,CAP）作为诊断检验的权威机构，制定了一整套较为完整的检测技术质量控制程序指南和实验室质量监控条例，该指南和条例从取材送材，到样本前处理、上机等，对检测所涉及技术的各个环节都作了详细规定。

所谓样本前处理，是指在实施检测方法之前，必须对生物样本在体外进行适宜的前处理操作，这一操作是保证这些技术实施效果的关键性步骤，将对检测结果的准确性产生较大影响。以上述三种最为常用的新型技术为例，生物样本的前处理操作主要涉及对样本中大量红细胞的有效去除，这一目标可以通过两种途径得以实现：（1）选用合适的红细胞裂解试剂（Red Blood Cell lysis agent），以一定比例的浓度与生物样本共孵育10-15分钟，成熟红细胞将发生裂解，其它细胞受到最小程度的影响；（2）密度梯度离心法分离处理，将血液或经过消化后的组织单细胞悬液小心铺在密度梯度介质上，经历30-45分钟离心后收获细胞层。由于裂解法操作简单，并最大程度保持原始白细胞各项生物学参数和形态，是目前应用最多的方法。例如，刘广印等报道了不同白细胞提取方法对于RT-PCR法检测巨细胞病毒的对比研究，结果显示氯化铵裂解法和密度梯度离心法得到的结果没有显著性差异，但前者由于操作简便，用时短，而成为了优选（刘广印等，实时荧光定量PCR检测巨细胞病毒两种白细胞提取方法对比分析，淮海医药，2007，25(2)：95-96）。又例如，田志华等人在研究大鼠前体脂肪细胞分化过程中波形纤维形态结构的变化和波形纤维蛋白基因表达的研究时，使用基于氯化铵配方的红细胞裂解液对大鼠脂肪组织进行红细胞裂解操作，然后对培养后的脂肪细胞进行免疫荧光观察和原位杂交（田志华等，大鼠前体脂肪细胞分化过程中波形纤维形态结构的变化和波形纤维蛋白基因表达的研究，遗传学报，2003，30(12)：1113-1117）。

红细胞裂解试剂的应用范围很广，不仅包括人的外周血、脐带血、骨髓等临床样本，还包括小鼠、大鼠、犬类、灵长类动物的外周血、骨髓、脾脏等动物类样本。实现快速、有效、完全的去除红细胞，并提高样本类型的兼容性是这一试剂在应用上追求的目标。此外，红细胞裂解试剂应在最大程度裂解红细胞的同时，对白细胞造成最小程度的影响。