[发明专利]三倍体丹参脱毒新品种的快速选育方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种植物新品种的选育方法，特别是三倍体丹参脱毒新品种（系）的快速选育方法。

背景技术

丹参（Salvia miltiorrhiza Bunge）是我国传统医药中应用最早、最广泛的中药之一，是著名的活血化淤药，在临床上被广泛用于治疗冠心病、心绞痛、缺血性中风等疾病。随着我国人口老龄化，心血管疾病成为危害人类健康的主要疾病，发病率逐年上升，对药物需求量增大。目前我国以丹参为原料生产的复方中药有100多种，对优质丹参药材的需求量巨大。自上世纪60～70年代，各地野生丹参转变家种成功后，生产有了较大发展，1978年收购4 000吨，销售6500吨，2007年产量达23000～24000吨，已成为一种重要的栽培药用植物。最近，中药界普遍把丹参视为中药的“模式中药”，中国科学院药用植物研究所还启动了丹参基因组测序工作，突显了丹参作为传统中药研究的地位。然而，随着栽培丹参的发展，凸显我国丹参遗传改良与新品种培育中的问题，主要有：①与其它栽培作物相比栽培丹参尚处在起步阶段，目前我国还没有一个通过杂交选育出来的丹参新品种，现有栽培丹参都是由野生直接变家种来，野生、半野生、栽培丹参之间的遗传相似系数在0.75～0.8之间，说明我国栽培丹参中很少有变异的积累-人工选择；②现在全国还没有一个公认的丹参主栽品种，只有四川从现有混杂的川丹参群体中经过系统筛选分离纯化出了大叶型（SA）和小叶型（SI）两个品种。因此，我国丹参的遗传改良与新品种培育势在必行，寻找一条有效的丹参新品种培育方法已是当务之急。近年来很多单位都已开展了有关丹参杂交育种及其相关的基础研究。高山林（2006）最先培育了丹参四倍体新品种，丹参产量提高了50%，有效化学成分提高了50～80%。江苏省从栽培品种混合种植的天然杂交当代（F1）中选出皱叶、单叶、小叶和原型4个品系新材料，正在扩大种植。河南省从裕丹参变异群体中已选出5个变异类型。山东省在对丹参开花与繁育特性研究的基础上，提出直接利用丹参的自然变异进行系统育种是丹参初期最有效的育种方法。陕西省已筛选到丹参雄性不育系Sh-B的三个不育类型Sh-B1、Sh-B2、Sh-B3。然而，至今尚未见丹参杂交育种取得突破性进展。

发明内容

本发明提供的是一种三倍体丹参脱毒新品种的快速培育方法，可以克服常规新品种选育周期长，需要5-8年的缺陷。本发明选育周期只需2年。它是建立在本项发明人早先发明的“丹参三倍体培育方法”的基础上，将产生变异的三倍体丹参或由于外界胁迫造成品种退化的三倍体丹参的体细胞作为外植体，采用组织培养快繁与脱毒技术相结合的方法，将其快速繁殖起来。不但第二年就可进行新品种比较试验，而且经过脱毒处理，恢复了三倍体丹参本来就存在的多倍体优势和杂种优势，三倍体丹参脱毒新品种表现生长旺盛（图5），药材产量和药物有效成分都能获得显着提高。

本发明提供的是一种三倍体丹参脱毒新品种的选育方.法，包括以下步骤：以三倍体丹参茎尖或新生幼叶为外植体，先进行脱毒处理，然后进行组织培养快繁。要使瓶苗达到一定数量，第2年就可进行三倍体丹参脱毒新品种评比试验，选育出药材产量提高20％以上，药物有效成分丹酚酸B和丹参酮ⅡA提高0.5-1倍以上，综合生物性状好的三倍体丹参脱毒新品种。

本发明提供的是一种三倍体丹参脱毒新品种的选育方法，包括以下步骤：

⑴取材：以下3种材料来源之一，均可进行三倍体丹参毒新品种的选育工作：①在三倍体丹参大田中新发现的变异植株茎尖或新生幼叶（图1）；②三倍体丹参杂交（2x♀×4x♂或4x♀×2x♂）当代种子幼苗茎尖或幼叶；③大田生产种植8年以上的三倍体丹参茎尖或新生幼叶；

⑵脱毒处理：在无菌操作条件下先用75％酒精消毒1分钟，再用0.1％升汞消毒10分钟，无菌蒸馏水冲洗5遍；

⑶光照培养：在光照周期14小时/天，光强度3000Lux，室温20-25℃条件下进行培养；

⑷扩大繁殖：待丛生芽生长出1-2片叶时，进行分瓶扩大繁殖，每瓶分装3-5棵苗；

⑸瓶苗移栽：待瓶苗长出新根，根长3-5公分时，进行瓶苗移栽。移栽前2天打开瓶盖进行练苗；

⑹移栽苗管理：刚移出的瓶苗要加强管理，成活率可达90％以上；

⑺三倍体丹参脱毒新品系（种）品种评比试验：按常规新品种评比试验要求进行，每个新选育出来的三倍体丹参脱毒新品（种）大田种植面积要达到2-3亩；

⑻三倍体丹参脱毒新品系（种）主要药物有效成分测定：按《药典》规定标准，测定丹参酮ⅡA和隐丹参酮含量。