[发明专利]一种具有中和活性的MERS-CoV合成肽疫苗及其应用

说明书

技术领域本发明涉及一种具有中和活性的MERS-CoV合成肽疫苗及其应用，该疫苗可进行免疫和疫苗接种，属于生物技术领域。 

背景技术目前已知的能感染人的冠状病毒共有六种，分别为20世纪60年代发现的人冠状病毒HCoV-229E和HCoV-OC43，2003年新出现的SARS(Severe acute respiratory syndrome)冠状病毒SARS-CoV，2004年发现的人冠状病毒HCoV-NL63，2005年新发现的人冠状病毒HCoV-HKU1以及2012年7月在中东地区出现的新型人冠状病毒：中东呼吸系统综合症冠状病毒(MERS-CoV，曾称HCoV-EMC)^[1]。 

MERS-CoV是2012年在中东地区从一个患有急性呼吸道疾病的病人中发现的一种新SARS样冠状病毒，病人的临床表现为急性呼吸道感染和肾功能衰竭。英国科学家通过对该病毒基因组测序及系统发生分析，发现该病毒为一种新的人冠状病毒(GenBank：JX869059)^[1]。该病毒基因组全长30118bp，基因组结构从5'端到3’端依次为：5'-UTR-ORFlab-S-ORF3-ORF4a-ORF4b-ORF5-E-M-N-3’UTR，从系统发生学分析认为该病毒属于β类冠状病毒的2c亚群，而与SARS基因组相似性为54.9％^[2]。美国CDC的监测数据显示，MERS-CoV病毒具有较高的致死率，从2012年4月至今全球已确诊的114例患者中已死亡54例，死亡率达54％^[3]。可见该病毒具有极高的危险性，很可能像SARS-CoV一样造成严重的呼吸感染疫情暴发。对于该病毒的疫苗和治疗药物的研发储备不容忽视。 

在机体限制病毒进入和传播的适应性免疫防御中，中和抗体发挥着十分关键的保护作用。研究显示，冠状病毒的S蛋白不仅是其亲嗜性的主要决定因素，同时也是诱导机体产生中和抗体的主要抗原靶标，因此冠状病毒疫苗的研发通常以S蛋白作为主要免疫原。然而到目前为止，尚缺乏对于新发MERS-CoV病毒S蛋白的免疫原性以及中和抗原表位的详细资料。 

我们通过生物信息学分析分析了MERS-CoV病毒S蛋白可能B细胞表位，从中筛选了部分得分较高的合成肽进行动物免疫后发现，采用MERS-CoV病毒S蛋白的抗原结合区(RBD，aa367-606)以及736-761位氨基酸多肽(aa736-761)免疫的实验动物血清中均能检测到有效的MERS-CoV中和抗体。其中RBD为传统的受体结合区域，已有数个研究小组的研究证明和提示其能诱导产生中和抗体^[4-8]。而aa736-761的中和抗体诱导能力此前未见报道，为本研究小组最新发现和证明的MERS-CoV特异性中和抗体诱导抗原，同时也说明其为MERS-CoV侵入细胞的潜在受体结合相关位点。 

这一发现具有重要的意义，不仅可以帮助理解该新发病毒感染的过程和机制，也能为阻断MERS-CoV感染提供新的疫苗设计思路。有望成为研发理想的MERS-CoV预防／治疗性候选疫苗的关键组分。 

发明内容：

本发明解决的问题在于提供一种MERS-CoV合成肽疫苗及其应用，将MERS-CoV合成肽免疫动物可以诱导出特异性的中和抗体。 

本发明是通过以下技术方案来实现： 

一种中东呼吸系统综合症冠状病毒的合成肽，其氨基酸残基序列如SEQ.ID.NO.1所示。 

所述的中东呼吸系统综合症冠状病毒的合成肽在制备针对中东呼吸系统综合症冠状病毒的预防性／治疗性疫苗的应用。 

所述的中东呼吸系统综合症冠状病毒的合成肽在制备抗中东呼吸系统综合症冠状病毒的药物的应用。 

所述的药物为诱发针对中东呼吸系统综合症冠状病毒中和抗体的体液免疫应答的药物。 

与现有技术相比，本发明具有以下有益的技术效果： 

本发明提供的中东呼吸系统综合症冠状病毒的合成肽，为全新的抗原表位区段，单独免疫即能诱导产生病毒特异的中和抗体，表现出良好的免疫原性和免疫效果。因此，该MERS-CoV合成肽疫苗可能成为MERS-CoV预防／治疗性候选疫苗的关键组分。 

附图说明

图1：MERS-CoVS蛋白结构及所用抗原所在位置示意图。 

图2：免疫血清中抗原特异性IgG的滴度测定。 

图3：所诱导抗体血清对体外抗原的特异性识别。 

图4：不同合成肽所诱导产生的抗体中和能力比较。