[发明专利]一种纺锤体驱动蛋白(Eg5)单克隆抗体及分泌该单克隆抗体的杂交瘤细胞株

说明书

技术领域

本发明涉及一种纺锤体驱动蛋白(Eg5)的单克隆抗体、分泌该单克隆抗体的杂交瘤细胞株以及所述的抗体的应用。 

背景技术

在癌细胞中，通常会特异性的发生某些基因的异常，如果能找到某种基因异常，导致它所编码的蛋白质表达或者定位发生改变，就能将该蛋白作为癌症诊断和治疗的靶分子。 

纺锤体驱动蛋白(Eg5)在有丝分裂早期对双极纺锤体的形成和复制染色体的分离起着至关重要的作用⁽¹⁾。在许多肿瘤细胞中都表达Eg5蛋白。Eg5在小细胞肺癌、前列腺癌及许多淋巴瘤细胞中持续高表达，扰乱了纺锤体的正常组装，最终导致纺锤体的缺失、基因组不稳定性以及肿瘤的发生。因此对于高表达Eg5的肿瘤，可以通过特异抑制Eg5的驱动蛋白活性，从而起到抗肿瘤的效果。因此，Eg5已成为一个具有吸引力的肿瘤化疗的靶点。目前开发出许多特异抑制Eg5活性的药物⁽²⁾。1999年报道了第一个小分子Eg5蛋白抑制剂monastrol⁽³⁾，由于其能诱导单星样纺锤体(monoastral spindle)的形成而得名。该药能特异性的结合Eg5蛋白并抑制其功能，诱导增殖的肿瘤细胞停滞在有丝分裂期，并促使细胞凋亡。Eg5蛋白抑制剂不作用于微管，不能被P-糖蛋白转移到细胞外，可克服由于P-糖蛋白过表达而引起的多重耐药性，故对紫杉烷类耐药的肿瘤也能起到有效的治疗效果。鉴于monastrol的有效的抗肿瘤细胞增殖作用，大量小分子Eg5抑制剂被相继研究开发出来。 

S(MeO)TLC(S-(methoxytrityl)-L-cysteine)⁽⁴⁾，一种强有力的细胞渗透性小分子Eg5蛋白抑制剂。S(MeO)TLC能特异性的与Eg5蛋白结合，诱导单极纺锤体的形成，其抑制细胞增殖。已有研究报道了S(MeO)TLC作为新型的Eg5蛋白靶向抑制剂，在膀胱癌、肾癌以及前列腺癌中表现出强有力的抗癌效能，并且相比以往报道的大量Eg5抑制剂，有效给药浓度更低、疗效更好、安全性和靶向特异性更高。 

Eg5相关的化疗药物的效果与Eg5的表达水平有密切关系。例如在非小细胞肺癌患者中，Eg5阳性的肿瘤化疗有效率是37％。而Eg5阴性的化疗有效性只有10％，表明Eg5的表达与化疗的效果是高度相关的，Eg5的表达情况可以预测非小细胞肺癌的化疗效果。检测肿瘤中的Eg5蛋白表达量，能够为肿瘤的治疗提供有力的用药依据，指导合理有效的用药。 

发明内容

本发明的目的是提供一种Eg5单克隆抗体(anti-Eg5)、分泌该单克隆抗体的杂交瘤细胞株。 

本发明所述的杂交瘤细胞为抗人Eg5杂交瘤细胞系3F1，该细胞系已保存于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为：CGMCC No.8353。保藏单位地址北京市朝阳区北辰西路1号院3号， 保藏日期2013年10月17日，分类名为“小鼠杂交瘤细胞株”。 

本发明还涉及所述单克隆抗体在制备抗肿瘤药物辅助制剂或诊断试剂中的应用，所述的肿瘤包括但不限于非小细胞肺癌、膀胱癌、肾癌以及前列腺癌。 

本发明所述的抗肿瘤药物辅助制剂包括但不限于，用于制定临床给药策略的阳性反应检测试剂、所述阳生反应为特定个体的Eg5蛋白高表达；或是用做特定抗肿瘤药物的偶联剂以增强该药物的靶向定位效果，所述的靶向定位为靶向Eg5蛋白。 

附图说明

图1、SDS-PAGE分析纯化后的GST-Eg5重组抗原。Lane1：未诱导的细菌全细胞裂解液；Lane2：IPTG诱导的细菌全细胞裂解液；Lane3：IPTG诱导的细菌裂解液上清；Lane4：IPTG诱导的细菌裂解液沉淀；Lane5：纯化的GST-Eg5重组抗原；M：蛋白marker。 

图2、SDS-PAGE分析纯化后的Eg5单克隆抗体。 

图3、免疫印迹法(Western blot)检测Eg5在A549(Lane1)、HeLa(Lane2)和PC-3(Lane3)细胞中的表达。Eg5单克隆抗体的稀释倍数分别为1：5000和1∶10000。 

图4、免疫沉淀法纯化HeLa细胞中的Eg5蛋白。 

图5、免疫共沉淀检测Eg5和DCTN1的相互作用。 

图6、免疫荧光检测PC-3细胞中Eg5蛋白的定位。 

具体实施方式

下述实施例中所用方法如无特别说明均为常规方法。 

试剂、酶、载体及细胞株：