[发明专利]用于孔雀石绿SPR检测的胶体金放大分子印迹膜的制备

权利要求书

1.一种在SPR传感器芯片表面原位合成分子印迹薄膜的方法，其特征由以下步骤组成：

(1)向含有3.3g TOAB的400ml甲苯溶液及200ml15mM的HAuCl₄·4H₂O水溶液的混合溶液中，缓慢滴入100ml含有655mg MUA的甲苯溶液，剧烈搅拌。再向该混合液中逐滴加入新配制的NaBH₄水溶液(0.3M，100ml)，继续搅拌1h。用去离子水冲洗并分离有机相，旋蒸去除有机相溶剂，所得残留物真空干燥1天，得到的黑色固体以2℃／min的速度热处理30min至155℃。所得产物溶于50ml的甲苯中，再将其逐滴加入800ml氯仿中，过滤去除过量的MUA和TOAB，得到胶体金，在室温干燥后溶于200ml二甲基亚砜中。

(2)称取20mg引发剂和2mg粘附剂溶于1mL四氢呋喃中，混和均匀。取100μL混合液滴于SPR传感器芯片表面，在匀胶台上旋涂均匀；

(3)称取27mg孔雀石绿与一定比例的功能单体、交联剂溶于3.5mL含有胶体金的二甲基亚砜中，制得预聚合液；(备注：功能单体包括甲基丙烯酸、N-异丙基丙烯酰胺、双功能单体甲基丙烯酸与N-异丙基丙烯酰胺的摩尔比为(1：2)、双功能单体甲基丙烯酸与N-异丙基丙烯酰胺的摩尔比为(2：1))

(4)将步骤(3)配置的预聚合液超声除气5min后，通氮气除氧8min。将旋涂了引发剂的SPR芯片浸入预聚合液中，继续通氮5min，密封反应容器，于真空干燥箱中60℃聚合16h。聚合完毕后将SPR芯片浸入甲醇：冰乙酸=9：1的混合溶液中洗脱模板分子6h。

2.一种基于分子印迹膜作为SPR传感器识别元件的检测孔雀石绿的方法，其特征由以下步骤组成：

(1)将表面聚合有分子印迹膜的芯片安装至SPR传感器(Autolab ESPRIT，荷兰)，用去离子水稳定芯片表面，直至基线稳定；

(2)以去离子水作为溶剂和载液，取50μL孔雀石绿溶液在芯片表面进行吸附反应600s，解吸附300s，测得该浓度孔雀石绿SPR响应值。用含1mM HCl、20％乙腈(V／V)的水溶液再生120s，洗脱吸附的孔雀石绿，以此循环对0.005-5μg／mL浓度范围内的孔雀石绿溶液进行检测；

(3)根据测得的SPR信号及相应的孔雀石绿浓度，绘制含有胶体金的、以N-异丙基丙烯酰胺为功能单体的分子印迹膜对孔雀石绿的吸附响应标准曲线：在0.005-0.25μg／mL浓度范围内，y=0.05053x+2.90427，R20.99871；在0.5-5μg／mL的浓度范围内，y=0.02985x+25.96318，R2=0.99817。最低检测限：0.005μg／mL，检测时间小于20min。