[发明专利]一种鉴别绵羊肉和山羊肉的方法及其试剂盒

说明书

技术领域：

本发明属于分子生物学检测领域，涉及利用DNA分子标记技术鉴别绵羊肉和山羊肉的方法。

背景技术：

羊肉通常是绵羊肉和山羊肉的统称，是我国传统的食药两用、营养丰富的肉类食品，一直以来深受消费者的喜爱。绵羊肉和山羊肉都具有蛋白含量高、低脂肪和低胆固醇的特性，但两者存在较大差异。山羊肉膻味重，胆固醇含量比绵羊肉低；绵羊肉比山羊肉脂肪含量高而口感细腻，膻味轻；中医认为，山羊肉属凉性，绵羊肉属热性，适合不同的人群食用。因此，受不同地区饮食习惯等因素的影响，消费者形成了对绵羊肉和山羊肉的选择性消费，直接引起绵羊肉和山羊肉的价格差异。

近年来，受羊肉消费需求急剧上升、饲养成本增加等因素影响，我国羊肉价格显著上涨。特别是市场流通的日益发达，羊肉经冷冻后再出售已是现代市场营销的主要手段。由于羊肉冷冻后通过感官检查很难区分其真假，一些不法商贩以价格低廉的禽肉冒充，损害了消费者利益。传统的感观检查和理化检验方法难以有效完成对绵羊肉和山羊肉的鉴别，也无法鉴别以禽肉假冒的冷冻羊肉，给当前的肉品监管工作提出了严峻挑战。

PCR全称聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction)，是体外酶促合成特异DNA片段的一种方法，由高温变性、低温退火(复性)及适温延伸等几步反应组成一个周期，循环进行，使目的DNA得以迅速扩增，具有特异性强、灵敏度高、操作简便、省时等特点。

凝胶电泳技术是分离、鉴定、纯化DNA分子的常用方法。根据电泳中所用介质的不同，主要有琼脂糖凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳。聚合后的凝胶形成网状结构，具有浓缩效应、电荷效应和分子筛效应，能够有效分离不同分子量大小的DNA片断。琼脂糖凝胶分离DNA片度大小范围较广，不同浓度琼脂糖凝胶可分离长度从200bp至近50kb的DNA片段，采用水平装置电泳。聚丙烯酰胺分离小片段DNA效果较好，其分辩力极高，甚至相差1bp的DNA片段都能分开，采用垂直装置电泳。

在动物源类肉品的种属鉴定方面，采用的遗传标记主要来源于线粒体基因组(常用的包括细胞色素b基因、12S rRNA基因、16S rRNA基因和控制区序列)，但未见应用基因组遗传标记鉴别绵羊肉和山羊肉的报道。

发明内容：

本发明的目的是构建一种快速有效的绵羊肉和山羊肉的分子鉴别方法。为了实现本发明的目的，拟采用如下技术方案：

本发明一方面涉及一种鉴别绵羊肉和山羊肉的方法，包括以下步骤：提取待测样品基因组DNA；采用上游引物：F5′-TCTCAGCCCAACTCCTGACACCATG-3′，下游引物：R5′-TGGGCAATTTTAAATGAGCAACCTT-3′，以所提取的样品基因组DNA为模板进行PCR扩增；采用凝胶电泳对扩增产物进行鉴定。

在本发明的一个优选实施方式中，所述的提取待测样品基因组DNA的方法为苯酚-氯仿法。

在本发明的另一个优选实施方式中，所述的凝胶电泳是聚丙烯酰胺凝胶电泳。

在本发明的另一个优选实施方式中，所述的凝胶电泳还包括标准样品的凝胶电泳，所述的标准样品是绵羊肉和/或山羊肉相应基因的PCR扩增产物。

本发明另一方面还涉及一种试剂盒，其包括上游引物：F5′-TCTCAGCCCAACTCCTGACACCATG-3′，下游引物：R5′-TGGGCAATTTTAAATGAGCAACCTT-3′。

在本发明的一个优选实施方式中，所述试剂盒中任选包括DNA聚合酶，Taq酶。

采用本发明的技术方案，能够有效和可靠地鉴别绵羊肉和山羊肉，在食品安全、打击假冒伪劣产品中具有广范的应用。

附图说明：

图1：新鲜和冷冻肌肉样品PCR扩增产物的1％琼脂糖凝胶电泳图谱。图中，泳道M为标准分子量参照DL2000，从上至下片断大小依次为2000bp、1000bp、750bp、500bp、250bp和100bp；泳道1为新鲜肉用山羊肉，泳道2为新鲜绒山羊肉，泳道3为新鲜奶山羊肉，泳道4为冷冻肉用山羊肉，泳道5为冷冻绒山羊肉，泳道6为冷冻奶山羊肉；泳道7为新鲜肉用绵羊肉，泳道8为新鲜毛用绵羊肉，泳道9为新鲜肉毛兼用绵羊肉，泳道10为冷冻肉用绵羊肉，泳道11为冷冻毛用绵羊肉，泳道12为冷冻肉毛兼用绵羊肉；泳道13为新鲜鸡肉，泳道14为新鲜鸭肉，泳道15为新鲜鹅肉，泳道16为冷冻鸡肉，泳道17为冷冻鸭肉，泳道18为冷冻鹅肉。