[发明专利]一种胆盐水解酶基因BSH及其重组原核表达载体

说明书

技术领域

本发明属于基因技术领域，尤其涉及一种胆盐水解酶基因BSH及其重组原核表达载体。

背景技术

胆盐水解酶（bile salt hydrolase,BSH）是微生物生长、繁殖过程中产生的一种代谢产物。该酶能水解结合态牛磺酸胆盐和甘氨酸胆盐,最终将其转变成氨基酸和游离胆酸，具有降低血清胆固醇的功能（KOCIUBINSKI G,PEREZ P,ANTONI G.Screening of Bile Resistance and Bile Peicipitation in LacticAcid Bacteria and Bifidobacteria[J].Food Prot,1999,62:905～912；Coleman JP,Hudson LL.Cloning and characterization of a conjugated bile acid hydrolase gene fromClostridium perfringens.Appl.Environ.Microbiol,1995,61:2518～2520.）BSH通常为胞内酶，微酸环境下的最适pH值一般在5和6之间，对氧气不敏感，该酶已经从多种微生物中得到了分离和鉴定（李贵节.降胆固醇乳杆菌的综合评价及胆盐水解酶活性研究.上海：上海交通大学.2008，2；牛治霞,刘恩梅.益生菌中胆盐水解酶(BSHs)研究进展.中国乳品工业,2007,35(9):35～40；BinderH.J,B.Filburn,M.Floch.Bileacidinhibition of intestinal anaerobic organism.Am.J.Clin.Nutr,1975,28(10):119～125；KIM G B,LEE B H.Biochemical and Molecular Insights Into Bile Salt Hydrolase in the Gastrointestinal Microflora a Review Asian-Aust[J].AnitaSci,2005,18:1505～1512）。目前，发现的产胆盐水解酶的菌株都是革兰氏阳性菌，其中包括部分的益生菌株，如:乳酸菌、双歧杆菌等；另外一部分则是与宿主以共生的形式寄生于肠道中的菌株，如：类杆菌、梭状芽孢杆菌、肠球菌等，通常生长在无胆盐的环境中菌株产生的BSH酶均不具有活性。

迄今为止有关胆盐水解酶的研究报道相对较少，国内的研究主要集中在降胆固醇机理、高产BSH酶优良菌株的筛选、BSH酶的纯化等方面；而国外也则正在进行有关BSH酶微生物分子生物学等方面的研究，但还至今未见有突破性进展。

发明内容

针对上述问题，本发明实施例的目的在于提供一种胆盐水解酶基因BSH及其重组原核表达载体。

本发明实施例是这样实现的，一种胆盐水解酶基因BSH，该胆盐水解酶基因BSH保藏号为CGMCCＮｏ.6540，来自屎肠球菌含有的两个BSH基因BSH1、BSH2，经比对两个序列相似性为68.10％。

本发明的另一目的在于提供一种含有上述屎肠球菌胆盐水解酶基因BSH1、BSH2的重组原核高效表达载体，其特征在于：所述重组原核表达载体是在pET-32a载体的多克隆位点中插入屎肠球菌胆盐水解酶基因BSH1、BSH2而获得；所述pET-32a载体表达量高，并带有Trx.Tag，His.Tag,S.Tag。

本发明提供了一种屎肠球菌胆盐水解酶基因BSH的两个不同的序列，分别命名为基因BSHI、BSH2，经比对两个序列相似性为68.10％，具有如SEQIDNo.1所示的核苷酸序列，还公开了含有该基因的重组原核表达载体，实验结果表明胆盐水解酶基因在E.coli BL21(DE3)宿主菌中进行了高效表达，也为研究出具有高效降解胆固醇的基因工程菌株提供了理论支持，同时为BSH基因在不同表达系统中的高效表达和表达调控的研究奠定基础。

附图说明

图1为基因BSH1温度梯度PCR扩增产物的琼脂糖凝胶电泳鉴定，1泳道为DL2,000DNA Marker，2～9泳道依次为65℃，64.2℃，63℃，61.1℃，58.7℃，56.9℃,55.7℃,55℃温度梯度扩增产物；

图2为基因BSH2温度梯度PCR扩增产物的琼脂糖凝胶电泳鉴定，1泳道为DL2,000DNA Marker，2～9泳道依次为65℃，64.2℃，63℃，61.1℃，58.7℃，56.9℃,55.7℃,55℃温度梯度扩增产物；