[发明专利]一种新的脯氨酸特异性内切蛋白酶基因及其应用

权利要求书

1.一种新的脯氨酸特异性内切蛋白酶基因，其特征在于其核苷酸序列如以下1）或2）所示：

1）其核苷酸序列为SEQ ID NO.1所示核苷酸序列；

2）在1）限定的核苷酸序列基础上经碱基的缺失、取代、插入或突变而成且具有编码有活性的脯氨酸特异性内切蛋白酶的核苷酸序列。

2.一种改造的脯氨酸特异性内切蛋白酶基因序列，其特征在于其核苷酸序列如以下1）或2）所示：

1）其核苷酸序列为SEQ ID NO.2所示核苷酸序列；

2）在1）限定的核苷酸序列基础上经碱基的缺失、取代、插入或突变而成且具有编码有活性的脯氨酸特异性内切蛋白酶的核苷酸序列。

3.权利要求1，2所述基因编码的蛋白质。

4.含有权利要求1,2所述基因的转基因细胞系。

5.含有权利要求1,2所述基因的基因工程菌。

6.含有权利要求1,2所述基因的表达载体或克隆载体。

7.根据权利要求5所述的基因工程菌，其特征在于，优选重组毕赤酵母GS115，KM71和SMD1168等，更优选GS115。

8.一种权利要求7所述生产脯氨酸特异性内切蛋白酶的重组毕赤酵母GS115的构建方法，其特征在于，选取重组毕赤酵母表达载体pPIC9，pPIC3K，pPIC9K，PAO815和pPICZα等，更优选pPIC9构建重组表达载体，以毕赤酵母GS115为宿主进行表达。

9.一种权利要求7所述生产脯氨酸特异性内切蛋白酶的重组毕赤酵母生产脯氨酸特异性内切蛋白酶的方法，其特征在于，利用甲醇对重组菌产脯氨酸特异性内切蛋白酶进行诱导表达；所述诱导表达条件为甲醇诱导终浓度为0.1%-2.0%，诱导温度20℃-30℃，诱导时间30h-120h。

10.权利要求1所述基因在提高啤酒，葡萄酒，果汁饮品等非生物稳定性的应用。