[发明专利]利用高效液相色谱法检测冬虫夏草中虫草酸含量的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种中药材的检测方法，具体是利用高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography/HPLC）检测冬虫夏草中虫草酸含量的方法。

背景技术

冬虫夏草，是麦角菌科真菌冬虫夏草寄生在蝙蝠蛾科昆虫幼虫上的子座及幼虫尸体的复合体，是一种传统的名贵滋补中药材，有调节免疫系统功能、抗肿瘤、抗疲劳等多种功效。药理学现代研究结果中，青海冬虫夏草含有虫草酸约7%，糖类28.9%，脂肪约8.4%，蛋白质约25%。冬虫夏草中82.2%为不饱和脂肪酸，此外，尚含有维生素B12、麦角脂醇、六碳糖醇、多种生物碱等。

据文献资料报道：北冬虫夏草中虫草酸的含量为3.09克，野生的虫草为5.54克，虫草酸是一种D-甘露醇，甘露醇能提高血浆渗透压，导致组织内的水分进入血管内，从而减轻组织水肿，补充血浆。虫草酸多用于脑水肿，防治急性肾功能衰竭，有调节心、脑、血管的作用，促进人体的新陈代谢、改善人体的微循环、降血脂、降血压。因此，虫草酸含量的高低也是判断冬虫夏草质量的重要指标之一。

查阅文献资料得知：冬虫夏草中虫草酸含量的检测方法主要是采用传统的显色方法或者测定吸光度的方法，这样会由于杂质的干扰而影响检测结果的准确性。

发明内容

本发明的目的就是为了解决现有虫草酸含量检测方法由于杂质干扰导致检测结果准确度较低的问题，提供一种能够将虫草酸与冬虫夏草中其余化学物质分离开来，再对虫草酸进行准确定量的一种利用高效液相色谱法检测冬虫夏草中虫草酸含量的方法。

本发明的检测方法，由下述步骤组成：

①供试品溶液制备冬虫夏草原药材35℃下鼓风干燥3天后，初磨至毫米级，再用南京南大球磨机粉碎至0.1μm级；称取0.1g冬虫夏草药材样品至具塞锥形瓶中，精密称定，加入水25mL，称定重量，超声提取30min，称重，补足减失重量，以0.45μm滤膜过滤，取滤液作为供试品溶液备用；

②对照品溶液制备精密称取55.51mg虫草酸对照品于50mL容量瓶中，以水溶解定容，摇匀，即得浓度为1093.547mg/L的虫草酸对照品溶液原液，再分别精密量取对照品原液0.5mL、1.0mL、2.0mL、4.0mL、6.0mL置于10mL容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得到浓度分别为54.67735mg/L、109.3547mg/L、218.7094mg/L、437.4188mg/L、656.1282mg/L的对照品溶液；

③建立标准曲线虫草酸的色谱分析采用氨基色谱柱，流动相为乙腈-水，体积比为83:17，流速1.0mL/min，进样体积：10μL，柱温：30℃，蒸发光散射检测器进行检测，漂移管温度为100℃，雾化气体流速为2.5L/min；在上述色谱条件下进行对照品溶液的色谱分析，得到各浓度对照品溶液的虫草酸色谱峰的峰面积，以浓度的对数为横坐标，相对应的色谱峰面积的对数为纵坐标建立标准曲线；

④供试品溶液的色谱分析按步骤③中所述的色谱条件进行供试品溶液的色谱分析，得到供试品溶液的虫草酸色谱峰的峰面积，带入标准曲线中计算即得到供试品溶液中虫草酸的含量。

本发明的检测方法通过提取冬虫夏草中化学物质，采用HPLC-ELSD利用各物质间的分配系数将各物质分开，ELSD检测器检测虫草酸的含量，检测过程中排出干扰，经加样回收试验验证，检测结果准确。

附图说明

图1是虫草酸标准曲线图；

图2是批号为20130506-1的虫草酸色谱图；

图3是批号为20130506-2的虫草酸色谱图；

图4是批号为20130506-3的虫草酸色谱图；

图5是批号为20130506-4的虫草酸色谱图；

图6是批号为20130506-5的虫草酸色谱图；

图7是批号为20130506-6的虫草酸色谱图。

具体实施方式

实施例1

①供试品溶液制备冬虫夏草原药材35℃下鼓风干燥3天后，初磨至毫米级，再用南京南大球磨机粉碎至0.1μm级；称取0.1g冬虫夏草药材样品至具塞锥形瓶中，精密称定，加入水25mL，称定重量，超声提取30min，称重，补足减失重量，以0.45μm滤膜过滤，取滤液作为供试品溶液备用；