[发明专利]甜瓜抗蔓枯病聚合基因材料用于哈密瓜育种的方法

说明书

一、技术领域

本发明甜瓜抗蔓枯病聚合基因材料用于哈密瓜育种的方法属于生物技术育种领域，涉及一份抗蔓枯病聚合基因材料用于哈密瓜抗蔓枯病品系的选育方法。

二、技术背景

哈密瓜(Cucumis melo var.saccharins)是新疆地区重要的经济作物，其品质好、含糖量高、香甜多汁、口感细腻、肉脆且营养丰富，被认为是水果中的佳品，在国内外享有盛誉。传统的哈密瓜仅适应大漠干旱和半干旱的新疆地区生长，但该地区种植哈密瓜的面积较小，远远满足不了需求。由于消费者对哈密瓜的需求，哈密瓜的种植已经面向全国。目前新疆以及全国哈密瓜生产依然存在一些亟待解决的问题，其中哈密瓜在设施栽培以及东南高湿地区栽培中病害的发生是限制哈密瓜高产优质的主要因素，而蔓枯病(Diaymella bryoniae)是病害中最严重、最普遍发生的，一旦发生，蔓延后将很难控制。蔓枯病是甜瓜生产比较普遍的一种病害(陈秀蓉等，1993；Keinath et al.,1995)。自1891年首次发现蔓枯病以来，美国(Chiu and Walker，1949)、日本和瑞典等国窖相继发现该病的发生，对甜瓜、西瓜和黄瓜等瓜类作物有不同程度的危害。甜瓜中哈密瓜发病情况更为严重，发病率达85％，严重的年份甚至绝产。因此培育高抗蔓枯病且商品性优异的哈密瓜品种和品系具有重要意义。

国际上常用的抗蔓枯病材料为PI140471、PI157082、PI511890、PI482398和PI482399(其抗性基因分别命名为Gsb-1、Gsb-2、Gsb-3、Gsb-4和gsb-5)，PI420145则是本课题组新筛选的1份甜瓜抗蔓枯病材料(Wolukan,2007)。蔓枯病菌存在生理小种的分化，若品种仅携带单个抗蔓枯病基因，则会因病原菌产生新的生理小种或转化型而导致其抗性降低甚至失去抗性。国内外研究表明，不同抗性基因的聚合有助于提高品种的抗性和抗谱(Yoshimura et al.，1995；徐建龙等，1996；郑康永等，1998；邵启，2004)，因此培育抗性相对持久的品种是提高品种抗性质量的有效途径之一。

CMTA170a是本课题组申请的专利《甜瓜抗蔓枯病基因Gsb-4的SSR标记》(申请号2011100810734)中筛选到的与PI482398的抗性基因Gsb-4连锁的SSR分子标记，可用于相关抗性基因的筛选；EcoRI-TG／MseI-CTC₂₀₀是本课题组申请的专利《甜瓜抗蔓枯病基因位点的分子标记方法》(申请号200710025531.6)中的与PI420145抗蔓枯病基因连锁的AFLP标记，可用于含PI420145抗蔓枯病基因的检测。而AFLP技术要求高，费用昂贵，所以将其转化为简单的SCAR标记SCAR₁₈₀₀，进而大大提高选择效率，减少成本消耗。目前本课题组已经利用抗源PI420145和PI482398得到了了一份聚合抗源材料4598(申请号2012102545615)。然而，上述研究未能得到高抗蔓枯病且商品性优异的甜瓜品系或品种，这在一定程度上限制了甜瓜抗蔓枯病遗传育种的进展，为了更充分发挥抗蔓枯病聚合基因材料的利用价值，推广其应用范围，我们在前期工作的基础上，通过与商品性优异的哈密瓜品种杂交、回交，筛选出了高抗蔓枯病且商品性良好的哈密瓜品系。

三、发明内容

技术问题

本发明是针对目前哈密瓜抗蔓枯病品种不足，抗性弱的现状，提供一套利用甜瓜抗蔓枯病聚合基因材料及其用于哈密瓜育种的方法，育成高抗蔓枯病且商品性优异的哈密瓜品系。

技术方案

本发明所提供的甜瓜抗蔓枯病聚合基因材料用于哈密瓜育种的方法，其实施方案如下：

1.甜瓜抗蔓枯病聚合基因材料用于哈密瓜育种的方法，包括：

1)以感蔓枯病的哈密瓜自交系‘白皮脆’为母本，聚合基因材料4598为父本，杂交，获得F₁，F₁苗期接种鉴定和分子标记辅助选择，选择聚合2份抗性基因且高抗的单株回交；

2)以‘白皮脆’为轮回亲本进行回交2代，且BC₁和BC₂均经过苗期蔓枯病接种鉴定和分子标记进行筛选，筛选得到聚合2份抗蔓枯病基因高抗蔓枯病的单株；

3)对含有聚合基因的BC₂单株自交，并对BC₂果实商品性进行测定，测定果实质量、含糖量等，选出果实品质好的单株自交，BC₂即为得到的抗蔓枯病且商品性良好的哈密瓜新品系。