[发明专利]经修饰的蛋白酶

权利要求书

1.分离的经修饰的多核苷酸，其编码经修饰的全长蛋白酶，其中所述经修饰的全长蛋白酶选自SEQ ID NO:13并且包含选自E57F、E57W、E57K、E57R、E57D、E57M、E57C、E57Q、E57S、E57H、E57N和E57G之一的突变，其中所述突变导致所述经修饰的全长蛋白酶与前体蛋白酶相比具有增强的生产活性。

2.权利要求1的分离的经修饰的多核苷酸，其中所述经修饰的全长蛋白酶是丝氨酸蛋白酶。

3.权利要求1的分离的经修饰的多核苷酸，其中所述经修饰的全长蛋白酶是源于野生型或变体前体碱性丝氨酸蛋白酶的碱性丝氨酸蛋白酶。

4.权利要求1的分离的经修饰的多核苷酸，其中所述前体碱性丝氨酸蛋白酶是克劳氏芽孢杆菌或迟缓芽孢杆菌碱性丝氨酸蛋白酶。

5.包含权利要求1－4任一项的经修饰的多核苷酸的载体。

6.用权利要求5的载体转化的宿主细胞。

7.权利要求6的宿主细胞，其中所述宿主细胞是微生物。

8.权利要求6的宿主细胞，其中所述宿主细胞是选自芽孢杆菌属、链霉菌属、埃希氏菌属和曲霉属的微生物。

9.权利要求6-8任一项的宿主细胞，其中所述宿主细胞是枯草芽孢杆菌细胞。

10.权利要求6-8任一项的宿主细胞产生的蛋白酶。

11.在微生物中产生异源蛋白酶的方法，所述方法包括步骤:

（a）在合适的条件下培养芽孢杆菌宿主细胞，其中，所述芽孢杆菌宿主细胞包含编码经修饰蛋白酶的经修饰的多核苷酸；以及

（b）允许所述微生物产生所述蛋白酶，

其中所述经修饰的全长蛋白酶选自SEQ ID NO:13并且包含选自E57F、E57W、E57K、E57R、E57D、E57M、E57C、E57Q、E57S、E57H、E57N和E57G之一的突变。

12.权利要求11的方法，其中回收所述芽孢杆菌宿主产生的所述异源蛋白酶。

13.权利要求11的方法，其中所述蛋白酶是碱性丝氨酸蛋白酶。

14.权利要求11-13任一项的方法，其中所述宿主细胞选自地衣芽孢杆菌、迟缓芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、短芽孢杆菌、嗜热脂肪杆菌、克劳氏芽孢杆菌、嗜碱芽孢杆菌、耐盐芽孢杆菌、凝固芽孢杆菌、环状芽孢杆菌、短小芽孢杆菌和苏云金芽孢杆菌。

15.权利要求11-13任一项的方法，其中所述异源蛋白酶是克劳氏芽孢杆菌或迟缓芽孢杆菌蛋白酶。

16.权利要求11-13任一项的方法，其中所述异源蛋白酶显示出至少为1的生产比例，其中生产比例表示从经修饰的蛋白酶加工的成熟蛋白酶的酶促活性与从未经修饰的蛋白酶加工的成熟蛋白酶的酶促活性之比。