[发明专利]流式细胞术鉴别诊断横纹肌肉瘤与神经母细胞瘤骨髓转移及白血病的荧光探针及试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及一种医疗检测试剂，尤其涉及一种流式细胞术鉴别诊断横纹肌肉瘤与神经母细胞瘤骨髓转移及白血病的荧光探针及试剂盒。 

背景技术

在临床上，儿童骨髓中出现肿瘤细胞常见的是白血病、横纹肌肉瘤与神经母细胞瘤，正确鉴别三者对患者的治疗具有重要的指导意义。横纹肌肉瘤与神经母细胞瘤是儿童常见的恶性实体肿瘤，对儿童生命有严重的威胁和危害。部分患者可以通过手术治疗得到康复。但本病易发生骨髓转移，常危及患儿生命，需及时采取化疗、放疗甚至自体干细胞移植等治疗措施。因此对骨髓转移的早期发现、早期诊断及早期治疗是提高治愈率、降低死亡率的关键。 

目前国内外主要通过骨髓细胞形态学检查来诊断横纹肌肉瘤与神经母细胞瘤骨髓转移，但细胞形态学对于早期转移的患者的诊断不敏感，容易产生假阴性结果，且两者细胞形态学与原始淋巴细胞和原始粒细胞相似，极易被误诊为白血病，同时横纹肌肉瘤与神经母细胞瘤在骨髓中的细胞形态学也相似而较难鉴别。 

正是由于目前的对诊断和鉴别诊断横纹肌肉瘤与神经母细胞瘤骨髓转移的各种检查方法还无法满足临床医生的要求，寻求一种快速简便且准确性和敏感性高的方法来诊断和鉴别诊断横纹肌肉瘤与神经母细胞瘤骨髓转移及白血病的方法极为重要。流式细胞术(Flow Cytometry,FCM)是近年来发展起来的高科学技术，它集计算机技术、激光技术、流体力学、细胞化学、细胞免疫学于一体，同时具有分析和分选细胞功能。它不仅可测量细胞大小、内部颗粒的性状，还可检测细胞表面和细胞浆抗原、细胞内DNA、RNA含量等，可对群体细胞在单细胞水平上进行多参数分析，即在同一细胞上进行2-3种或多种抗原的共同表达的分析，在短时间内检测 分析大量细胞，并收集、储存和处理数据，进行多参数定量分析，具有敏感性和准确性高的特点，目前临床上多运用于白血病和淋巴瘤的骨髓标本的诊断，而对横纹肌肉瘤与神经母细胞瘤的诊断和鉴别诊断罕见报道。由于两者细胞目前没有单一的特异性的抗原标志物，流式细胞术对鉴别诊断横纹肌肉瘤与瘤神经母细胞瘤骨髓转移及白血病关键在于多种抗体的组合。 

发明内容

本发明提供了一种流式细胞术鉴别诊断诊断横纹肌肉瘤与神经母细胞瘤骨髓转移及白血病的荧光探针，利用该荧光探针可以快速、准确的得到诊断结果。 

一种流式细胞术鉴别诊断横纹肌肉瘤与神经母细胞瘤骨髓转移及白血病的荧光探针，包括四种荧光标记抗体，所述四种荧光标记抗体为均带有荧光标记的GD2抗体、CD90抗体、CD45抗体和CD56抗体，其中，不同的抗体带有不同的荧光标记。 

横纹肌肉瘤是儿童最常见的软组织肿瘤，神经母细胞瘤属于神经内分泌性肿瘤，而CD56是一类免疫球蛋白样区域的膜糖蛋白神经细胞粘附分子，在神经外胚层来源的细胞表面表达。CD90和CD56作为粘附分子表达在横纹肌肉瘤细胞及神经母细胞瘤上，NK细胞主要也表达这种140kDa的CD56异构体，而CD45是血细胞系列限制性的膜蛋白分子，表达在除了红细胞外的包括造血干细胞到成熟血细胞（包括NK细胞）膜表面上，因此CD90+CD56+/CD45-表型可以避免误诊为NK细胞肿瘤和白血病，并可以作为判断神经内分泌肿瘤及横纹肌肉瘤存在的指证。 

神经母细胞瘤细胞来源于分化差的神经节细胞，其表面有神经黏附分子CD56抗原和神经节苷脂GD2的表达，而不表达白细胞共同抗原CD45，横纹肌肉瘤是起源于横纹肌细胞或向横纹肌细胞分化的间叶细胞的一种恶性肿瘤，不表达神经节苷脂GD2。同样白血病细胞不表达GD2但其表达白细胞共同抗原CD45及原始细胞标志CD90，因此可以通过多色流式细胞术测定这四种抗原的不同表达来识别横纹肌肉瘤、神经母细胞瘤及白血病原始细胞这三类儿童骨髓标本中常见的肿瘤细胞。三者具有不同的免疫表型，即： 

横纹肌肉瘤细胞：GD2^-CD90⁺CD56⁺CD45^-； 

神经母细胞瘤细胞：GD2⁺CD90⁺CD56⁺CD45^-； 

急性白血病原始细胞：GD2^-CD90⁺CD56^-CD45⁺。 

本发明联合GD2、CD90、CD56和CD45四种荧光标记抗体作为探针，运用目前医院常见的多色流式细胞仪检测细胞的免疫表型（一管法）即可鉴别诊断横纹肌肉瘤与神经母细胞瘤骨髓转移及白血病，特异性可达100%。