[发明专利]一种微小RNA拮抗剂及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物医药领域，尤其涉及一种微小RNA拮抗剂及其应用。

背景技术

脑中风是世界人群中排名第三的死因，并且是造成成年人残疾的首要病因。据统计，美国每年有50～75万人发病；在中国，脑中风发病人数达250万/年，死亡人数达160万/年。脑中风已超过心肌梗塞，成为国人死亡的首要病因。脑中风不仅致死率高，而且高达75%的卒中患者还会留下神经行为功能损伤和认知障碍等后遗症，造成社会和家庭的沉重经济负担。脑中风主要分为两种类型，70%以上为缺血性脑中风，其是指各种血栓在不同脑区引起脑血管堵塞，从而造成缺血性脑损伤，其中最常见的为大脑中动脉堵塞；另外不到30%是由脑血管破裂导致的脑出血，最终也造成脑供血不足及缺血性脑损伤。脑缺血也是心脏骤停导致的后果之一。

脑缺血可引起脑内一系列细胞和分子应答机制，这些机制交织在一起最终决定了脑神经细胞的死亡和存活。目前发现，脑缺血导致的神经元死亡或损伤的机制主要有：过量兴奋性氨基酸（如谷氨酸）释放导致的神经元损伤机制、大量自由基导致的损伤机制以及脑缺血引起的脑内过度炎症应答而导致的神经炎症损伤机制。这些病理损伤机制对脑中风治疗药物的研制和开发具有重要意义。

miRNA是近年来发现于真核生物细胞中的一类长约22个核苷酸的内源性非编码小分子RNA，可通过与靶mRNA的3’-UTR互补结合在转录后水平使其降解，或者与之不完全互补结合在翻译水平抑制蛋白合成，从而在基因表达中发挥重要的调节作用。

目前，越来越多的研究证实，miRNA在脑缺血后的表达水平发生显著变化，提示其参与了脑缺血损伤作用，并参与脑缺血损伤后的保护和修复机制的调控。有研究表明，大鼠脑缺血再灌注24小时后血浆中miR-19b、miR-290、miR-292-5p的表达明显升高，这些miRNAs很可能成为脑卒中的实验室诊断标志物。另有文献报道，抑制小鼠miR-497表达，可以明显减少小鼠脑缺血后大脑皮层的梗死体积，减轻脑缺血损伤。在星型胶质细胞中miR-181通过调控Bcl-2和Mcl-1在细胞脑缺血模型中导致线粒体功能紊乱：miR-181的上调加剧脑缺血损伤。“miR-3473b”具有如SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列，于2010年首次在小鼠的尿液和生殖系统中被发现，目前，尚无关于miR-3473b任何系统功能的报道。

发明内容

有鉴于此，本发明要解决的技术问题在于提供一种微小RNA拮抗剂及其作为神经炎症抑制剂的应用。

本发明提供了一种微小RNA在调控脑缺血后炎症因子表达中的应用；该微小RNA具有如SEQ ID NO：1所示核苷酸序列，或在SEQ ID NO：1所示核苷酸序列中取代、缺失或添加一个或几个核苷酸的序列。

作为优选，用于调控脑缺血后炎症因子表达的微小RNA的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。

该微小RNA为人工合成，或来自动物样本，包括组织或细胞。

细胞实验证实，具有如SEQ ID NO：1所示核苷酸序列的微小RNA在小鼠原代培养星型胶质细胞缺糖缺氧模型组中表达明显高于正常组。下调具有如SEQ ID NO：1所示核苷酸序列的微小RNA能明显抑制IFN-γ和LPS诱导的星型胶质细胞炎症因子表达；且具有如SEQ ID NO：1所示核苷酸序列的微小RNA在LPS刺激的BV2细胞中的表达明显高于正常细胞；下调具有如SEQ ID NO：1所示核苷酸序列的微小RNA可以抑制BV2细胞炎症因子iNOSmRNA的表达

动物实验证实：以对侧脑及假手术组小鼠相应脑区分离纯化的eGFP+星型胶质细胞为对照，对转基因小鼠缺血脑内分离纯化的eGFP+星型胶质细胞进行miRNA表达谱分析，具有如SEQ ID NO：1所示核苷酸序列的微小RNA在缺血组织中表达明显升高。随后用动物脑缺血模型验证，具有如SEQ ID NO：1所示核苷酸序列的微小RNA在缺血侧组织中表达明显高于对侧和假手术组。因此证明，具有如SEQ ID NO：1所示核苷酸序列的微小RNA在脑缺血组织中被明显诱导表达，说明该微小RNA可起到调控神经疾病后的炎症应答的作用，下调其表达可抑制脑缺血后炎症因子的表达。

本发明还提供了一种微小RNA拮抗剂，其为经修饰的微小RNA反向互补序列；

该微小RNA具有如SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列，或在SEQ ID NO：1所示核苷酸序列中取代、缺失或添加一个或几个核苷酸的序列；

修饰为：胆固醇修饰、硫代骨架修饰或甲氧修饰。