[发明专利]一种双链聚肌胞干粉的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种双链聚肌胞干粉的制备方法。

背景技术

双链聚肌胞是一种人工合成的双链核糖核酸，可诱导产生干扰素，具有广谱抗病毒作用；此外还有调节机体免疫功能，增强人体非特异性免疫功能和某些特异性免疫功能，达到抗肝细胞坏死和抗肿瘤作用等。

双链聚肌胞在化妆品中应用可以消除痘痘、扁平疣等皮肤赘生物。

双链聚肌胞在兽药方面主要应用于预防和治疗家禽、家畜病毒性疾病，使用方便、广泛，可以与许多药物同时使用, 具有协同或相加作用。本品无种属特异性，可广泛在家禽、猪、牛等动物上使用，同时它还具有抗病毒谱广，毒性小、安全范围大的优点。

双链聚肌胞是一种动物免疫增强剂，可作为疾病治疗辅助用药，增强动物肌体免疫力、提高药物的疗效。同时，双链聚肌胞也是一种免疫佐剂，在用疫苗免疫的同时使用，可明显提高免疫效果，并且有预防免疫应激及其它病毒性疾病的发生。

一方面，目前粉末状聚肌胞是制剂形式（是预混剂，不是原料形式），一般多采用聚肌苷酸溶液和聚胞苷酸溶液经聚合后，直接添加辅料制得，该干粉中聚肌胞的含量偏低。 

另一方面，现已报道的文献中，聚肌胞制剂的制备一般是以聚肌苷酸、聚胞苷酸为原料经过一步反应后得到中间体聚肌胞溶液，再进行制剂工序的操作。其不足之处在于，首先制剂生产线中增加聚合反应步骤，不仅增加操作的复杂性，还增加了监控的难度。其次，聚肌胞中间体是以溶液形式存在，贮藏条件及期限更加严格。

因此，本领域迫切需要提供一种含量高、稳定性高且制备简单的双链聚肌胞干粉的制备方法。

发明内容

本发明目的是提供一种含量高、稳定性高且制备简单的双链聚肌胞干粉的制备方法。

    本发明采用的技术方案是：

一种双链聚肌胞干粉的制备方法，所述方法包括：

（1）    将聚肌苷酸和聚胞苷酸各自用适量pH 6.0~8.0的磷酸盐缓冲液溶解，混合后加入稳定剂，混合均匀，在40~100℃下保温0.5~5小时；所述稳定剂为下列之一或其中两种以上的混合物：卡那霉素、壳寡糖、氯化钙、多聚赖氨酸（包括各种规格的ε-多聚赖氨酸、L-多聚赖氨酸等）、葡萄糖酸钙；所述聚肌苷酸、聚胞苷酸质量用量之比为1∶0.5～1.5，稳定剂质量为聚肌苷酸和聚胞苷酸质量之和的0.2~2.0倍；所述磷酸盐缓冲液用量以将聚肌苷酸和聚胞苷酸充分溶解为宜，推荐用量为将聚肌苷酸和聚胞苷酸配制成10~100 g/L的溶液；

（2）步骤（1）反应液自然冷却后与0.5~20倍体积的有机溶剂混合，静置沉淀0.5~72小时，取沉淀物20~60℃低温干燥，即得所述双链聚肌胞干粉；所述有机溶剂为下列之一或其中两种以上的混合物：乙醇、甲醇、丙酮、乙醚、异丙醇、正丙醇。

本发明中的双链聚肌胞干粉为原料形式，采用碱基互补配对原则将多聚肌苷酸、多聚胞苷酸，并加入稳定剂聚合后，再用有机溶剂沉淀得到高质量的双链聚肌胞干粉。该干粉中双链聚肌胞含量高，可直接用于各种剂型制剂的制备，可以使制剂的制备过程更加简单，易于操作，目前市场需求量很大。另外，加入稳定剂不仅可以增大分子量，还可以使双链聚肌胞的稳定性（由于PIC为大分子聚阴离子，加入稳定剂后可以使PIC双链结构的稳定性增加）增强，优于溶液形式，易于保存。另外经过有机溶剂沉淀处理后样品的增色效应（通过碱处理使双链聚肌胞的双螺旋结构破坏,碱基充分外露, 导致紫外吸收增加的现象称为增色效应，该指标直接影响产品的功效）指标更优。

优选的，步骤（1）所述稳定剂为壳聚糖，多聚赖氨酸（包括各种规格的ε-多聚赖氨酸、L-多聚赖氨酸等）或卡那霉素。

优选的，步骤（2）所述有机溶剂为乙醇或甲醇。

优选的，步骤（1）中，所述聚肌苷酸、聚胞苷酸质量用量之比为1∶0.8～1.2，稳定剂质量为聚肌苷酸和聚胞苷酸质量之和的0.2~1.5倍。 

所述双链聚肌胞干粉可进一步制成双链聚肌胞水溶液，因此所述方法在步骤（2）之后还可包括步骤（A）：配制pH6.0~8.0的磷酸盐缓冲液，加入适量的双链聚肌胞干粉和NaCl，定容至双链聚肌胞干粉终浓度为0.01~1.0 g/L，NaCl终浓度为4.5g~9.0g/L，即得所述双链聚肌胞水溶液。按此方法制得的双链聚肌胞水溶液，疗效高，安全可靠，无毒、无害、无残留，工艺简单，实用性强，可用于预防和治疗人和动物病毒性疾病，也可用作免疫佐剂。