[发明专利]一种脂蛋白(a)检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及一种脂蛋白(a)检测试剂盒。

背景技术

脂蛋白(a)是一种与LDL(低密度脂蛋白)结构相近的人体血清中的蛋白，密度介于HDL(高密度脂蛋白)与LDL之间。脂蛋白(a)核心部分为中性脂质和apoB-100分子，其外围包绕着亲水性的apo(a)，二者以二硫键共价连接；其中apo(a)是高度糖化的亲水性蛋白质，肽链长度很不一致，分子大小呈明显多态性。对apo(a)cDNA的分析发现，apo(a)属于纤溶酶原基因超家族，与纤溶酶原有高度同源性。与纤溶酶原类似，apo(a)含有一个羧基端蛋白酶样结构域和一个Kringle结构域，尽管apo(a)的蛋白酶结构域与纤溶酶原85%同源，却没有催化活性，所以脂蛋白(a)可以竞争性干扰纤溶酶原的生理功能。纤溶酶原分子中有5种Kringle（分别命名为K1、K2、K3、K4、K5，各一个），apo(a)中只有一个K5（与纤溶酶原的K5同源85%）和若干个K4（与纤溶酶原K4同源78%-88%），所以apo(a)的多克隆抗体难免与纤溶酶原有交叉反应。

由于apo(a)大小不均一性，脂蛋白(a)含十几个至50多个的K4，使apo(a)占脂蛋白(a)分子的百分比从27%到51%不等。目前临床实验室常用的免疫比浊法所用的单抗或多抗主要作用于K4，导致对不同大小脂蛋白(a)的检测产生较大的偏差。

大量的流行病学和临床研究表明，脂蛋白(a)在不同人群的血液中差异很大，不同个体间脂蛋白(a)的水平可相差100倍。但在同一个体血清中浓度相对稳定，除遗传因素外，几乎不受年龄、性别、吸烟、饮食、脂代谢、药物、环境等因素的影响。因此脂蛋白(a)是一种比较稳定的生物标记物。血清中高浓度的Lpa是动脉硬化和心脏疾病危险程度的指标。血浆脂蛋白(a)升高与多种心血管疾病，包括外周血管病、脑血管病、早发冠心病和糖尿病血管并发症等有关。脂蛋白(a)浓度超过30mg/dL时，通常患心脏疾病的危险性比正常人高2倍。

目前，脂蛋白(a)的检测方法有：放射免疫法、ELISA法、免疫比浊法和脂蛋白(a)-胆固醇法等，其中放射免疫法因其存在放射性污染而已渐被市场淘汰；酶联免疫法自动化程度不高，且受人为因素影响较大；脂蛋白(a)-胆固醇法是近年来兴起的一种方法，优点在于可避免免疫测定法中因apo(a)多态性给Lp(a)测定带来的难题，缺点是方法操作复杂，需要用超速离心或其它方法从血浆中分离出脂蛋白(a)，然后再用胆固醇酶法检测脂蛋白(a)，因此难以得到广泛应用；免疫比浊法与其它方法相比，优点是简便快速、灵敏可靠，不需要从血浆中分离出脂蛋白(a)，可直接用于自动或半自动生化分析仪，有较大应用范围，市场前景良好，缺点是对不同大小的apo(a)分子检测偏差较大，与纤溶酶原有交叉反应，易受类风湿因子干扰。因此，找到一种既能够避免检测偏差又操作简便的检测方法是本领域亟需解决的技术问题。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提出一种应用于免疫比浊法的脂蛋白(a)检测试剂盒，解决免疫比浊法对不同大小的apo(a)分子检测偏差较大、与纤溶酶原有交叉反应以及易受类风湿因子干扰的问题。

基于上述目的本发明提供的脂蛋白(a)检测试剂盒由试剂1、试剂2和工作校准液组成：

其中试剂1的组分为(各组分的百分比为质量浓度百分比)：

试剂2的组分为(各组分的百分比为质量浓度百分比)：

工作校准液(各组分的百分比为质量浓度百分比)

优选的试剂1、试剂2和工作校准液的组分分别为：

试剂1：(各组分的百分比为质量浓度百分比)

试剂2：(各组分的百分比为质量浓度百分比)

工作校准液(各组分的百分比为质量浓度百分比)

本发明的脂蛋白(a)检测试剂盒的试剂1选用pH6.0-9.0的缓冲液，选自PBS缓冲液、GOOD’S缓冲液、Tris-HCl缓冲液和甘氨酸缓冲液中的一种。表面活性剂有利于样本中各种物质的溶解，减少样本脂浊对测定结果的影响，可以选用Tween20（吐温-20）、Triton X-100等非离子型表面活性剂。IgG可以消除非特异性干扰和类风湿因子干扰，可以选自羊IgG、鼠IgG和兔IgG中的一种。