[发明专利]番茄环斑病毒快速检测盒

说明书

技术领域

本发明涉及生物检测领域，具体涉及一种用免疫层析技术检测植物番茄环斑病毒感染的装置。 

背景技术

番茄环斑病毒(tomato ring spot virus,ToRSV)是检疫性病毒病害之一，是线虫传多面体组成员，可感染105属157种草本和木本植物，主要感染果树和浆果作物，属我国对外检疫的一类检疫性有害生物。ToRSV的检测方法主要有生物学、血清学和电镜技术，ELISA和PCR是应用最多的两种检测ToRSV的技术。但是上述技术普遍存在着对人员、环境要求高的问题，难以进行现场快速检测。免疫层析技术是上世纪90年代发展起来的一种基于抗原抗体反应的简便快速检测技术，该技术已经广泛应用于临床、食品安全检测领域。胶体金免疫层析检测试纸条是体外快速检测试剂的主要品种之一。以其快速、简便、价廉、所用样品量少、可以直接测定未经处理的样品、污染小、不需要贵重仪器、可以直观判断结果、易于基层和现场使用等优点，而得到广泛应用。但是胶体金免疫层析试纸条的灵敏性不够理想，这大大限制了它在检测领域中的广泛应用。 

采用比纳米金颗粒信号更为强的标记物质即可在一定程度上提高免疫层析试纸条的灵敏性。新型的荧光纳米颗粒恰恰具有这样一种优势。荧光纳米颗粒是将荧光物质（如FITC、量子点、稀土螯合物）包裹在高分子材料中，形成纳米颗粒（Nanoparticles，NPs）。包裹作用一方面能使更多的发光分子连接在生物分子上起到信号放大作用，另一方面可克服外界环境对发光试剂的影响(如淬灭作用等)，增加发光试剂的稳定性。包裹着荧光分子或其它发光分子的纳米颗粒比单个荧光分子有高得多的发光强度和光化学稳定性。荧光纳米颗粒还具有颗粒均一，大小任意可调等优势；尤其是在标记方面，完全摒弃了胶体金依靠被动物理吸附的标记方式，采用定向共价偶联技术，几乎完整保持了抗体和抗原的活性，使检测的背景噪音大大降低。采用相同的抗原和抗体试剂，荧光纳米颗粒在灵敏性上可以轻易超出胶体金1-2个数量级，是极有应用前景的生物分子标记材料。 

发明内容

本发明的目的在于提供一种使用方便，灵敏度高的针对番茄环斑病毒快速检测装 置，用于植物番茄环斑病毒感染的现场快速检测。 

本发明公开一种番茄环斑病毒快速检测盒，包括盒盖、盒身和试纸条，盒盖上设置用于收纳荧光纳米颗粒-番茄环斑病毒抗体偶联物的反应槽，盒身内设置试纸条收纳位；所述的试纸条是番茄环斑病毒快速检测试纸条，由底板和附着在底板上依次紧密相接的样品垫、层析膜和吸水垫组成，所述的层析膜上设有检测区和质控区，检测区固定与番茄环斑病毒发生特异性反应的单克隆抗体或多克隆抗体。所述番茄环斑病毒快速检测盒的形式更有有益于产品的保存和使用，检测时荧光纳米颗粒-番茄环斑病毒抗体偶联物与检测样品充分接触，更有助于阳性样品的检出，并且时间证明有非常高的灵敏度。 

为适用不同情况下的番茄环斑病毒快速检测，本发明所述的番茄环斑病毒快速检测盒可制备为各种具体的实施方式。 

为实现多次使用的目的，本发明的番茄环斑病毒快速检测盒的具体实施方式之一是在所述的盒身内设置试剂瓶收纳位，所述的试剂瓶收纳位放置收纳了荧光纳米颗粒-番茄环斑病毒抗体偶联物的棕色试剂瓶。试剂瓶中预先灌入可供多次使用量的荧光纳米颗粒-番茄环斑病毒抗体偶联物反应液。使用时，向反应槽中倒入一次检测量的反应液，即可进行后续检验。为了避免所述荧光纳米颗粒-番茄环斑病毒抗体偶联物的失活，该实施方式下的番茄环斑病毒快速检测盒需要于4℃度保存。 

为应用于多个样品检测目的，本发明的番茄环斑病毒快速检测盒的另一具体实施方式是在所述检测盒中配置具孔反应板，所述具孔反应板上设有用于容纳荧光纳米颗粒-番茄环斑病毒抗体偶联物的盲孔。作为优选地，所述的具孔反应板从整体外型上与盒身反应槽相匹配，具孔反应板上设有多个孔径0.5～1.0cm、深度0.5～1.0cm的盲孔。所述的荧光纳米颗粒-番茄环斑病毒抗体偶联物可以采用上文述及的试剂瓶方式保存，使用时加入到具孔反应板的盲孔中。更为优选地，是在盲孔中预先吸附冻干的荧光纳米颗粒-番茄环斑病毒抗体偶联物。检测过程中，将具孔反应板取出放置于反应槽中，并以每一个盲孔作为一个独立的展开槽进行加样检测。可实现同时对对多个样品的检测。 

上述各个技术特征，也可以在番茄环斑病毒快速检测盒的设计中组合使用，其组合而成的技术方案也应当在本发明所延及的范围内。