[发明专利]从血液中分离高纯度循环肿瘤细胞的方法

权利要求书

1.一种从血液中分离高纯度循环肿瘤细胞的方法，其特征在于，包括如下步骤：

A、在微流控芯片的微通道的至少一个表面负载单链多核苷酸，该单链多核苷酸能够与抗体-标记单链多核苷酸复合物中的标记单链多核苷酸特异性结合，该抗体-标记单链多核苷酸复合物能够与循环肿瘤细胞表面独特抗原特异性结合，通过微通道表面的单链多核苷酸与标记单链多核苷酸的特异性结合形成多核苷酸双链使微通道表面负载抗体，其中单链多核苷酸中存在能够被切断的化学基团或核酸序列；

B、将血液样品与微流控芯片微通道表面负载的抗体接触，并通过微通道表面负载的抗体与循环肿瘤细胞表面特异性抗原的结合将循环肿瘤细胞从血液样品中分离出来并固定在微通道表面上；

C、通过将单链多核苷酸切断实现抗体以及被其捕获的循环肿瘤细胞从微通道表面释放，从而获得高纯度的循环肿瘤细胞。

2.一种从血液中分离高纯度循环肿瘤细胞的方法，其特征在于，包括如下步骤：

A、在微流控芯片的微通道的至少一个表面负载单链多核苷酸，该单链多核苷酸能够与抗体-标记单链多核苷酸复合物中的标记单链多核苷酸特异性结合，该抗体-标记单链多核苷酸复合物能够与循环肿瘤细胞表面独特抗原特异性结合，其中单链多核苷酸中存在能够被切断的化学基团或核酸序列；

B、将血液样品与抗体-标记单链多核苷酸复合物混合与孵育后，与微流控芯片微通道表面负载的单链多核苷酸接触，通过微通道表面负载的单链多核苷酸与和循环肿瘤细胞表面特异性抗原结合的抗体-标记单链多核苷酸复合物中的标记单链多核苷酸的特异性结合形成多核苷酸双链，将循环肿瘤细胞从血液样品中分离出来并固定在微通道表面上；

C、通过将单链多核苷酸切断实现抗体以及被其捕获的循环肿瘤细胞从微通道表面的释放，从而获得高纯度的循环肿瘤细胞。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述的血液样品是指经过抗凝处理的全血样本，其体积为1毫升至10毫升，所用抗凝剂包括EDTA、柠檬酸或肝素。

4.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述抗体-标记单链多核苷酸复合中的标记单链多核苷酸与负载于芯片微通道表面的单链多核苷酸能够特异性结合并形成稳定的双链结构，两种单链多核苷酸中至少有连续的10个核苷酸互补，或至少有连续的20个核苷酸互补。

5.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述抗体-标记单链多核苷酸复合物中的标记单链多核苷酸通过共价键与抗体直接相连，或者抗体与标记单链多核苷酸通过共价键或其他作用力共同连接在纳米粒子上。

6.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述能够特异性结合循环肿瘤细胞表面独特抗原的抗体-标记单链多核苷酸复合物可以是一种，也可以是针对不同抗原的多种不同的抗体-标记单链多核苷酸复合物。

7.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述能够被切断的化学基团为可被特定波长紫外光切断的光敏基团。

8.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述能够被切断的核酸序列为可被限制性内切酶切断的核苷酸序列。

9.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，其后可以串联一个能够特异性捕获白细胞的芯片，用于去除释放细胞中的白细胞，从而进一步提高分离循环肿瘤细胞的纯度。