[发明专利]一种沙枣组织培养方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种沙枣培养方法。

背景技术

沙枣（Elaeagnus angustifolia L.）属胡颓子科胡颓子属，为落叶或常绿灌木或小乔木。别名：银柳胡颓子（东北木本植物图志）、桂香柳（河南）、银柳（辽宁）等。该树种在我国的西北荒漠、半荒漠地区、华北、山东及东北地区均有分布，沙枣也是极少能在戈壁滩上生存下来的树种之一，被誉为沙漠和盐碱地的“宝树”。

沙枣全身是宝：叶含蛋白质4%、粗脂肪2.4%、糖15.7%，是优质的饲料。沙枣果肉粉含粗蛋白7.94%、粗脂肪1.34%、糖51.15%，可用于副食品加工，也可以代替粮食。沙枣花馥郁清香，可提取芳香油，又是很好的蜜源。沙枣根有根瘤菌，可固氮改善土壤。沙枣种子中子仁含油量20.69%，可用于生产清洁燃料（生物柴油）在未来能源逐渐短缺的背景下，开发利用生物质能源已成为一种必然的发展趋势。沙枣树可营造沙枣经济林、防护林，并能育成风景林，绿化美化城市。

因此，扩大沙枣的栽种面积和数量有助于环境改善和农民增收，沙枣产量的提高更有利于提高国民身体素质。

依靠沙枣种子进行种植，不但生长周期长，而且成功率低。目前广泛采用组织培养的方法栽种沙枣，但是，采用沙枣腋芽或顶芽进行组织培养存在扩培数量少、倍数低的问题；而采用组织培养出的叶片或叶柄进行诱导获得愈伤组织，或者采用长出腋芽的茎段诱导获得愈伤组织进行繁殖，又存在生根率低，成活率低的缺陷。

发明内容

本发明是为了解决目前沙枣组织培养扩培数量少、倍数低，或者利用愈伤组织进行繁殖生根率低，成活率低的缺陷，而提供的一种沙枣组织培养方法。

沙枣组织培养按以下步骤进行：

一、采集沙枣当年生枝条，反复冲洗后进行水培，嫩芽长到2～3cm长用剪刀剪下放在烧杯中，烧杯口用纱布盖住，清水滴浇2h±0.1h，然后取出嫩芽浸入浓度为75%的酒精中45s，再用无菌水冲洗3次，之后放入浓度为6%的NaClO溶液中处理6min，再用无菌水清洗3～5次，吸干水分后无菌操作将嫩芽上的叶片剪除，并将嫩芽的茎剪切成长度为1±0.2cm、带有节间的茎段，再将茎段接种于不含任何植物激素的MS培养基中，在25℃、每日光照16h、光照强度为2000lux的环境中初始培养10天；

二、选初始培养长出的无菌苗叶的叶柄部分切成0.5cm×0.5cm大小，然后转移至每升含有0.5mg6-苄氨基嘌呤和1.5mg萘乙酸的MS培养基中25℃培养60天；然后将愈伤块在无菌条件下切割成0.2cm×0.2cm×0.2cm大小转移至每升含1.0mg萘乙酸和0.5mg6-苄氨基嘌呤的MS培养基中25℃培养30天，长出幼芽；

三、将步骤二长出的幼芽移植于每升含有1.0mg萘乙酸和10mg多效唑的1/2MS培养基中培养20天，得到沙枣试管苗，然后经过炼苗，即完成沙枣的组织培养；

其中步骤一MS培养基中蔗糖浓度为30g/L、琼脂浓度为5.5g/L，MS培养基的pH值为5.8。

本发明将步骤一嫩芽上的叶片剪除，然后利用嫩芽的茎段长出的再生叶片的叶柄培养获得沙枣愈伤组织，该愈伤组织能够提高沙枣的生根率；本发明利用愈伤块进行繁殖，将扩培倍数提高到125倍以上，而且试管苗的生根率可达到了92%，生根数可达到4～6根，根平均长度为1.7cm，保证了沙枣的存活率，为加快沙枣的推广种植奠定了技术和物质基础。

本发明方法对来自新疆的阿勒泰、呼图壁，甘肃的张掖、武威，宁夏的中卫，哈萨克斯坦的那乌尔祖母国家自然保护区等不同种源的沙枣都适用，组织培养的效果和数据基本相同。

附图说明

图1是具体实施方式一中步骤二长出的幼芽图片。图2是具体实施方式一步骤三得到的沙枣试管苗图片。

具体实施方式

本发明技术方案不局限于以下所列举具体实施方式，还包括各具体实施方式间的任意组合。

具体实施方式一：本实施方式沙枣组织培养按以下步骤进行：

一、采集沙枣当年生枝条，反复冲洗后进行水培，嫩芽长到2～3cm长用剪刀剪下放在烧杯中，烧杯口用纱布盖住，清水滴浇2h±0.1h，然后取出嫩芽浸入浓度为75%的酒精中45s，再用无菌水冲洗3次，之后放入浓度为6%的NaClO溶液中处理6min，再用无菌水清洗3～5次，吸干水分后无菌操作将嫩芽上的叶片剪除，并将嫩芽的茎剪切成长度为1±0.2cm、带有节间的茎段，再将茎段接种于不含任何植物激素的MS培养基中，在25℃、每日光照16h、光照强度为2000lux的环境中初始培养10天；