[发明专利]检测乙肝表面抗原的免疫层析试纸及其制备方法

权利要求书

1.检测乙肝表面抗原的免疫层析试纸，其特征在于：包括依次连接的样品垫（1）、硝酸纤维膜（2）和吸水垫（3），所述样品垫（1）含有超顺磁性复合粒子标记抗HBsAg抗体；所述硝酸纤维膜（2）包被有相互分离的检测线（4）和质控线（5），所述检测线（4）含有抗HBsAg包被抗体，所述质控线（5）含有能与抗HBsAg标记抗体特异结合的羊抗鼠IgG。

2.根据权利要求1所述的检测乙肝表面抗原的免疫层析试纸，其特征在于：所述超顺磁性复合粒子标记抗HBsAg抗体是将抗HBsAg抗体和超顺磁性复合粒子以肽键共价结合形成聚合体。

3.根据权利要求2所述的检测乙肝表面抗原的免疫层析试纸，其特征在于：所述超顺磁性复合粒子标记抗HBsAg抗体的制备方法包括以下步骤：

a、活化磁性粒子的制备：按重量份数比，称取超顺磁性复合粒子2～3份、EDC0.5～1.5份和NHS1～3份，混匀，在35℃～40℃下反应20～40分钟，随后采用缓冲液洗涤，得活化磁性粒子；

b、含有偶联后磁性粒子的反应液制备：按重量份数比，称取所述活化磁性粒子2～3份、抗HBsAg抗体0.1～0.2份和硼砂缓冲液0.5～1份，混匀，在35℃～40℃下反应3～4小时，得含有偶联后磁性粒子的反应液；

c、取所述含有偶联后磁性粒子的反应液，加入占整个所述反应液体积0.5%～1.5%的BSA溶液，混匀，在35℃～40℃下反应20～40分钟，随后将反应得到的封闭后磁性粒子进行洗涤、悬浮，得到超顺磁性复合粒子标记抗HBsAg抗体成品。

4.根据权利要求3所述的检测乙肝表面抗原的免疫层析试纸，其特征在于：所述超顺磁性复合粒子为超顺磁性Fe₃O₄纳米粒子；所述超顺磁性复合粒子的粒径为60nm～300nm，该粒径的偏差在10%～30%之间；所述超顺磁性复合粒子的磁饱和强度为30emu/g～80emu/g，对应的外磁场响应速度为20秒～100秒。

5.根据权利要求2所述的检测乙肝表面抗原的免疫层析试纸，其特征在于：在将所述抗HBsAg抗体和超顺磁性复合粒子以肽键共价结合形成聚合体前，还包括将该超顺磁性复合粒子进行活化，使超顺磁性复合粒子表面带有官能团。

6.根据权利要求5所述的检测乙肝表面抗原的免疫层析试纸，其特征在于：所述官能团为羧基或氨基中的一种；所述官能团的含量为50～500μmol/g。

7.根据权利要求1所述的检测乙肝表面抗原的免疫层析试纸，其特征在于：在所述检测线（4）中含有抗HBsAg包被抗体的浓度为1～3mg/ml；在所述质控线（5）中含有羊抗鼠IgG的浓度为0.5～2mg/ml。

8.根据权利要求1所述的检测乙肝表面抗原的免疫层析试纸，其特征在于：所述抗HBsAg包被抗体为抗乙肝表面抗原单克隆抗体或抗乙肝表面抗原多克隆抗体中的一种；所述抗乙肝表面抗原标记抗体为抗乙肝表面抗原单克隆抗体或抗乙肝表面抗原多克隆抗体中的一种。

9.一种基于权利要求1-8中任一项所述的检测乙肝表面抗原的免疫层析试纸的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：将样品垫（1）、硝酸纤维膜（2）和吸水垫（3）依次连接，将含有抗HBsAg包被抗体和含有羊抗鼠IgG分别喷涂于硝酸纤维膜（2）两端的不同区域，对应形成检测线（4）和质控线（5），得成品。

10.根据权利要求1所述免疫层析试纸在制备乙肝表面抗原检测试纸中的应用。