[发明专利]一种翘嘴鲌雌核发育诱导方法

说明书

技术领域

本发明涉及鱼类生物技术，尤其涉及一种翘嘴鲌雌核发育诱导方法。

背景技术

翘嘴鲌（Culter alburnus Basilewsky）是我国重要的淡水经济鱼类之一。目前，养殖用翘嘴鲌大部分仍停留在利用天然亲鱼或多代选留的养殖种，不仅其养殖性状未被挖掘，而且由于亲本选择不当、近亲繁殖等原因，养殖性状已出现生长缓慢、肉质品质下降等不同程度的种质衰退现象。人工雌核发育诱导是鱼类快速固定母本性状和进行性别控制的重要技术手段，可加快鱼类尤其是世代周期较长鱼类的育种进程和效率。已有研究表明，经过一次人工雌核发育诱导约相当于14世代全同胞交配选育，多数鱼类经过连续两次雌核发育就可以作为品系（种）亲本用于育种生产。然而，鱼类雌核发育诱导方法常因种类和选用的刺激源不同而有所差异。选择遗传距离较远且杂交不育的鱼类精子作为激活源，不仅可获得大量雌核发育鱼，而且子代易于鉴别，是一种良好的雌核发育诱导方法。前期，我们开展了鲤鱼与翘嘴鲌的杂交试验，结果表明，鲤鱼精子能激活翘嘴鲌卵子发育，但因染色体数目不匹配等原因，孵化出膜仔鱼多数畸形且出膜不久后死亡，显示鲤鱼可以作为翘嘴鲌雌核发育诱导的激活源。目前，有关翘嘴鲌雌核发育诱导仍未见报道。为此，我们选择鲤鱼精子作为激活，经紫外线灭火精子遗传物质，冷休克抑制卵子第二极体释放，成功建立了翘嘴鲌异源雌核诱导方法，并获得了大量第一代雌核发育鱼和多个第二代雌核发育鱼家系，为后续翘嘴鲌选育及全雌育种提供了重要的技术支撑。

发明内容

本发明目的在于提供一种翘嘴鲌雌核发育诱导方法，选取鲤鱼精子作为激活源，经紫外线遗传灭活，进而冷休克处理抑制卵子第二极体释放，不仅获得了大批量翘嘴鲌雌核发育鱼，而且还极大的简化雌核发育鱼的鉴定工作。

本发明的技术方案为：一种翘嘴鲌雌核发育诱导方法，包括如下步骤：

（1）采集鲤鱼精液；

（2）对鲤鱼精液进行紫外线遗传灭活处理；

（3）采集翘嘴鲌成熟卵子，用经过紫外线遗传灭活处理后的鲤鱼精液进行干法授精；

（4）受精卵进行冷休克处理后放入孵化容器中进行孵化，正常成活的鱼苗即为雌核发育鱼。

受精卵于授精后1-6min内进行10-35min的冷休克处理。

受精卵在2-4℃的温度下进行冷休克处理。

所述受精卵授精后4分钟进行冷休克处理。

所述受精卵进行冷休克处理的最佳时间为15分钟。

鲤鱼精子在进行紫外线遗传灭活处理时，处理到60-70%的鲤鱼精子仍具有活力后停止紫外线处理，将处理后的鲤鱼精子保存用于第（3）步的授精。

鲤鱼精子的紫外线遗传灭活处理方法为：

A、用Hank’s氏液按体积比1:5 稀释鲤鱼精子，将稀释后的鲤鱼精子均匀涂在4℃预冷的培养皿中；

B、用紫外线灯对培养皿上的精液进行照射，照射过程中缓慢摇动培养皿使照射均匀；

C、每隔2-4min观察精子活力，当60-70%的鲤鱼精子具有活力时停止照射。

紫外线遗传灭活处理后的精液保存于4℃的遮光容器中。

用于采集鲤鱼精液的雄鲤鱼亲本为2-3龄，体重0.5 kg以上的健康雄鲤鱼。

用于采集翘嘴鲌卵子的翘嘴鲌雌鱼亲本按以下方式进行强化培育：

a、将体重1.0kg以上的翘嘴鲌进行专池培育，雌雄比2:1；

b、培育初期投喂膨化配合饲料，后期增投鲜活饵料（野生小杂鱼）；

c、繁殖季节时，挑选雌雄翘嘴鲌亲本，人工催产后放入催产池中，流水刺激，雌雄比1:2。

有益效果：

1. 本发明具有较强的可操作性。本发明采用普通鲤鱼的紫外线遗传灭活精子刺激翘嘴鲌卵子，通过冷休克抑制卵子第二极体释放促使染色体加倍的方法，成功获得翘嘴鲌雌核发育个体。雌核发育二倍体仔鱼的孵化率和成活率较高。

本发明获得雌核发育鱼苗易于鉴别。正常存活个体即为雌核发育鱼，不需要再进行后续的染色体、遗传标记等鉴定分析，显著简化了鉴定程序。

附图说明

图1是采用本发明获得的翘嘴鲌雌核发育鱼的初孵仔鱼实体图；

图2是采用本发明获得的翘嘴鲌雌核发育鱼的1冬龄鱼种实体图；

图3是采用本发明获得的翘嘴鲌雌核发育鱼的染色体图

图4是引物HLJHB01在雌核发育群体中的扩增图谱； 

图5是引物S129在3个群体中的扩增图谱；