[发明专利]一种检测与肺癌易感性及化疗敏感性相关基因的多态性的试剂盒及其应用

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种检测与肺癌易感性及化疗敏感性相关基因的多态性的试剂盒及其应用。

背景技术

Wnt1诱导通路蛋白1（Wnt1 indμcible signaling pathway protein 1，WISP1）是生长因子高半胱氨酸蛋白61/结缔组织生长因子/肾母细胞瘤基因（CYR61/CTGF/NOV.CCN）家族的成员之一，对细胞增殖、粘附、生存等具有调节作用。

人类WISP1基因位于8q24.1-q24.3，有5个外显子和4个内含子，编码367个氨基酸，编码蛋白为40kDa。有研究表明，WISP1的表达水平与多种肺疾病相关，如急性肺损伤，肺纤维化及肺癌等。在非小细胞肺癌患者的癌组织中，WISP1呈高表达现象，并且其表达水平与非小细胞肺癌患者的预后相关。

研究报道WISP1基因多态性与多种疾病相关，并采用了不同的基因分型方法来进行检测。例如，A2364G(rs2929970)多态性与多种疾病相关。有研究采用Taqman探针法证明了它与脊柱骨关节炎相关；用溶解曲线法探究了此位点与高血压的关系；还有用质谱分型方法研究了它与结肠癌的关系。溶解曲线法及质谱分型是针对大样本多位点的高通量分型方法，而Taqman探针法是中通量分型的金标准，并且具有灵敏性高、花费相对较少的优点。

Taqman探针法是在PCR上下游引物间选取一段序列作为探针，并在探针上标记荧光基团和淬灭基团，该探针可与模板结合，在延伸反应中，当引物合成至探针与模板结合处是，Taq酶的5’外切酶活性可以讲解探针的5’端，使荧光基团和淬灭基团分离，释放荧光。相对于传统的限制性片段长度多态性聚合酶链反应（PCR-RFLP），Taqman探针法具有灵敏性更高、操作更简单的优势，且通量更高。

发明内容

本发明旨在提供一种检测与肺癌易感性及化疗敏感性相关基因的多态性的试剂盒，该试剂盒可用于制备检测与肺癌易感性及化疗敏感性相关基因多态性的试剂。

为了达到上述目的，本发明提供的技术方案为：

所述检测与肺癌易感性及化疗敏感性相关基因的多态性的试剂盒中含有检测WISP1基因C3290T位点的探针和引物，所述探针和引物能与WISP1基因C3290T位点前后的基因序列特异性结合并扩增出包含WISP1基因C3290T位点的基因序列。

优选地，所述探针和引物是与WISP1基因C3290T位点前后500bp的基因序列特异性结合并能扩增出包含WISP1基因C3290T位点的基因序列。

优选地，所述检测与肺癌易感性及化疗敏感性相关基因的多态性的试剂盒中含有如下探针：

FAM-TAAGTGCCTTAGCAAAAG-MGB（SEQ ID NO.1）；

VIC-ATTAAGTGTCTTAGCAAAAG-MGB（SEQ ID NO.2）；

该试剂盒中还含有如下引物：

5’-AGCTCTCTTCTTCCAAAGCTACATG-3’（SEQ ID NO.3）；

5’-TCTTGCATACGCATACACAAATATATG-3’（SEQ ID NO.4）。

其中，FAM吸收波长485-505nm，发射波长515-530nm；VIC吸收波长515-535nm，发射波长540-560nm；MGB为淬灭基团。所述与肺癌易感性及化疗敏感性相关基因为WISP1基因C3290T。

所述探针、引物及包含两者的试剂盒均可应用于制备检测与肺癌易感性及化疗敏感性相关基因多态性的试剂。

本课题组的前期研究表明，WISP1基因多态C3290T（rs2977549）可能通过影响WISP1在血浆中的表达水平，从而与肺癌易感性及其铂类药物化疗敏感性相关，而之前并无相关报道。

WISP1 C3290T位点位于WISP1基因3’非翻译区（3’ΜTR），在中国汉族人群中，其最小等位基因频率（Minor Allele Freqμency,MAF）为38.3%。由于目前还没有有关C3209T基因多态性及其功能的相关报道，本课题组近期研究才发现其与非小细胞肺癌铂类药物化疗敏感性相关，所以还没有人检测过WISP1基因C3290T多态性，更没有相关检测的试剂盒产品面世。因此，探索检测与肺癌易感性及化疗敏感性相关基因的多态性的方法及产品显得意义深远。

本发明的试剂盒能准确、快速、简便地检测与非小细胞肺癌铂类药物化疗敏感性相关的基因位点（WISP1基因C3290T多态性）。