[发明专利]一种重组腺病毒及其制备和应用

权利要求书

1.一种重组腺病毒，其特征在于：将IL-10基因与过敏原基因共同包装到腺病毒载体，形成具有感染活力但不致病的复制缺陷型腺病毒载体。

2.根据权利要求1所述的重组腺病毒，其特征在于：所述过敏原基因为具有致敏活性的蛋白质过敏原基因，且所述过敏原基因在宿主细胞中作为重组蛋白质表达。

3.根据权利要求1所述的重组腺病毒，其特征在于：过敏原基因为卵清蛋白（OVA）基因。

4.根据权利要求1-3所述的重组腺病毒，其特征在于：IL-10基因与过敏原OVA基因进行融合表达，融合蛋白的氨基酸序列如SEQ ID No.3所示。

5.权利要求1-3任一项所述重组腺病毒的制备方法：采用腺病毒载体系统，将IL-10基因及过敏原OVA基因分别克隆入同一腺病毒穿梭质粒的多克隆区，构建同时表达IL-10和OVA的重组穿梭质粒，将该重组穿梭质粒与腺病毒骨架质粒共转化宿主细胞，经同源重组生成重组腺病毒质粒，再经包装细胞包装获得具有感染活力的腺病毒颗粒，并在包装细胞中进行扩增，收集并裂解包装细胞后，纯化得到重组腺病毒载体。

6.权利要求5所述重组腺病毒的制备方法：采用AdEasy腺病毒系统，将人IL-10基因及过敏原OVA基因依次分别克隆入同一穿梭质粒pAdTrack-CMV的多克隆区，构建重组穿梭质粒pAdTrack-IL-10-OVA，将该重组穿梭质粒经经限制性内切酶Pme I线性化后与骨架质粒pAdEasy-1共转化大肠杆菌BJ5183，经同源重组生成重组腺病毒质粒，经限制性内切酶Pac I酶切，酶切产物纯化后借助脂质体转染包装细胞系293细胞，包装获得具有感染活力的重组腺病毒颗粒。将初次包装所获得的原代腺病毒颗粒，继续感染293细胞，进行病毒扩增，待293细胞完全病变后，将其收获裂解，最后纯化得到重组腺病毒载体。

7.一种疫苗，其特征在于：主要成分为权利要求1－4任一项所述的重组腺病毒。

8.一种组合物，其特征在于：主要成分为权利要求1－4任一项所述的重组腺病毒。

9.权利要求1-3任一项所述的重组腺病毒或权利要求7所述的疫苗或权利要求8所述的组合物在制备治疗过敏性疾病药物中的应用。

10.权利要求9所述的应用，所述过敏性疾病为尘螨、霉菌、花粉、动物皮毛、昆虫、食物或橡胶等中的蛋白质变应原所致的过敏性鼻炎、过敏性哮喘、过敏性结膜炎、荨麻疹、特应性皮炎、荨麻疹或严重过敏反应等。