[发明专利]木聚糖酶、编码它们的核酸以及其制备和应用方法

权利要求书

1.分离的、合成的或重组的核酸序列，其中所述核酸序列是

SEQ ID NO:1的核酸序列，其具有在编码氨基酸残基4的密码子处由ACC变为CGC的核苷酸残基改变。

2.扩增编码具有木聚糖酶、甘露聚糖酶和/或葡聚糖酶活性的多肽的权利要求1所述的核酸序列的方法，包括用扩增引物序列对扩增模板核酸，所述扩增引物序列对能够扩增权利要求1所述的序列。

3.表达盒、或载体，其包括这样的核酸序列，所述核酸序列由权利要求1所述的序列组成。

4.转化细胞，其含有权利要求1所述序列的核酸，或权利要求3所述的表达盒、或载体，其中所述细胞是细菌细胞、哺乳动物细胞、真菌细胞、或昆虫细胞。

5.转化细胞，其含有权利要求1所述序列的核酸，或权利要求3所述的表达盒、或载体，其中所述细胞是酵母细胞。

6.分离的、合成的或重组的多肽，其具有木聚糖酶、甘露聚糖酶和/或葡聚糖酶活性，其中所述多肽由SEQ ID NO:2所述的氨基酸序列组成，并且具有在氨基酸残基4处从T(或thr或苏氨酸)变为R(或arg或精氨酸)的氨基酸残基改变。

7.权利要求6所述的多肽的蛋白质制剂，其中所述蛋白质制剂是液体、固体或凝胶。

8.权利要求6所述的多肽和第二结构域的异二聚体，其中所述第二结构域是多肽以及所述异二聚体是融合蛋白，或所述第二结构域是表位或标记。

9.权利要求6所述的多肽的同型二聚体，以及所述同型二聚体是融合蛋白。

10.固定化多肽，其中所述多肽是权利要求6所述的多肽，其中所述多肽被固定化在木屑、纸、细胞、金属、树脂、聚合物、陶瓷、玻璃、微电极、石墨颗粒、珠子、凝胶、板、阵列或毛细管上。

11.制备抗木聚糖酶和/或抗葡聚糖酶抗体的方法，其包括以足以产生体液免疫应答的量给予非人动物权利要求1所述的核酸序列编码的多肽，从而制备抗木聚糖酶和/或抗葡聚糖酶抗体。

12.制备抗木聚糖酶和/或抗葡聚糖酶抗体的方法，其包括以足以产生体液免疫应答的量给予非人动物权利要求6所述的多肽，从而制备抗木聚糖酶和/或抗葡聚糖酶抗体。

13.产生重组多肽的方法，其包括下列步骤：(a)提供与启动子可操作地连接的核酸，其中所述核酸是权利要求1所述的序列；和(b)在允许所述多肽表达的条件下表达(a)的所述核酸，从而产生重组多肽，以及用(a)的所述核酸转化宿主细胞，随后表达(a)的所述核酸，从而在转化细胞中产生重组多肽。

14.用于鉴定具有木聚糖酶、甘露聚糖酶和/或葡聚糖酶活性的多肽的方法，其包括：

(a)提供权利要求6所述的多肽；

(b)提供木聚糖酶、甘露聚糖酶和/或葡聚糖酶底物；和

(c)将(a)的所述多肽与(b)的所述底物接触，并且检测底物量的降低或反应产物量的增加，其中底物量的降低或反应产物量的增加检测出具有木聚糖酶、甘露聚糖酶和/或葡聚糖酶活性的多肽。

15.用于鉴定木聚糖酶、甘露聚糖酶和/或葡聚糖酶底物的方法，其包括：

(a)提供权利要求6所述的多肽；

(b)提供测试底物；和

(c)将(a)的所述多肽与(b)的所述测试底物接触，并且检测底物量的降低或反应产物量的增加，其中底物量的降低或反应产物量的增加鉴定出作为木聚糖酶、甘露聚糖酶和/或葡聚糖酶底物的测试底物。