[发明专利]一种链霉菌正向突变株筛选方法

说明书

技术领域

本发明涉及微生物菌株筛选领域，具体而言，涉及一种链霉菌正向突变株筛选方法。

背景技术

现有抗生素大部分由链霉菌产生。为提高抗生素生产菌株的产量，往往需要对生产菌株进行诱变，提高该菌株的抗生素产量。但是，从大量突变株中准确挑选出正向突变的高产菌株存在较大困难。

目前，高产菌株的筛选方法主要是用灭菌后的牙签或接种环从再生平板上挑取单菌落孢子，之后将孢子直接接种于装有固体培养基的96孔板上。由于孢子接种量存在巨大差异，生长在96孔板每个板孔中培养基上的菌数不同，之后取整个板孔中的培养基进行浸提，测定生产的抗生素含量会有很大差异。因此，采用牙签或接种环挑取再生菌落孢子直接接种，很难实现接种量一致，筛选的菌株容易出现假阳性。因此，上述筛选方法存在准确度低的问题。

发明内容

本发明的目的在于提供一种链霉菌正向突变株筛选方法，以解决上述的问题。

在本发明的实施例中提供的一种链霉菌正向突变株筛选方法，包括以下步骤：

对一部分原始菌株进行诱变；

将原始菌株以及诱变的菌株分别接种于再生平板上，并培养至生长成熟；

分别取生长成熟的原始菌株孢子以及多个生长成熟的诱变菌株孢子，并分别制备成浓度为10⁶-10⁷个/ml的孢子悬液；

由每个孢子悬液中取出相同体积的孢子悬液，且取出的体积小于孢子悬液的总体积；

将取出的孢子悬液分别接种于筛选平板不同板孔的培养基上且使孢子悬液均匀分布于培养基上，培养至生长成熟；

从筛选平板的每个板孔中均取出相同体积的培养基块，分别进行浸提并测定抗生素含量；

将诱变菌株的抗生素含量和原始菌株的抗生素含量对比，挑选出产抗生素能力高于原始菌株的正向突变菌株。

本发明提供的链霉菌正向突变株筛选方法中，将所取的孢子制成孢子悬液且孢子悬液中孢子的浓度为10⁶-10⁷个/ml，限定了不同菌株制备的孢子悬液的浓度差异。悬液中孢子的浓度是相对均一的，由每个孢子悬液中取出的孢子悬液是相同体积，且取出的体积小于孢子悬液的总体积，因此，用于接种的孢子数量小于总孢子数量，这样对于每个菌株来说，接种的孢子数量之间的差异减小，这样就可以避免因接种量的巨大差异而导致筛选出的菌株出现假阳性，从而避免筛选准确性低的问题。

附图说明

图1示出了采用液态培养基灌装时不同温度下各板孔中培养基重量的差异图；

图2示出了采用培养基块灌装时各板孔中培养基重量的差异图；

图3示出了超声波震荡提取效率图。

具体实施方式

下面通过具体的实施例子并结合附图对本发明做进一步的详细描述。

实施例1：

在本发明的实施例中提供的一种链霉菌正向突变株筛选方法，包括以下步骤：

对一部分原始菌株进行诱变；

将原始菌株以及诱变的菌株分别接种于再生平板上，并培养至生长成熟；

分别取生长成熟的原始菌株孢子以及多个生长成熟的诱变菌株孢子，并分别制备成浓度为10⁶-10⁷个/ml的孢子悬液；

由每个所述孢子悬液中取出相同体积的孢子悬液，且取出的体积小于孢子悬液的总体积；

将取出的孢子悬液分别接种于筛选平板不同板孔的培养基上且使孢子悬液均匀分布于所述培养基上，培养至生长成熟；

从筛选平板的每个板孔中均取出相同体积的培养基块，分别进行浸提并测定抗生素含量；

将诱变菌株的抗生素含量和原始菌株的抗生素含量对比，挑选出产抗生素能力高于原始菌株的正向突变菌株。