[发明专利]家畜衣原体Taqman-MGB探针实时荧光定量PCR检测用引物、试剂盒和方法

说明书

技术领域

本发明涉及动物疫病分子生物学检验方法及检验试剂领域，具体涉及一种家畜衣原体Taqman-MGB探针实时荧光定量PCR检测用引物、试剂盒和方法。

背景技术

动物衣原体病(Chlamydiosis)是由各类衣原体(Chlamydia)感染哺乳动物、禽类等动物所发生的一类十分重要的自然疫源性传染病。该病呈地方流行，常造成很大危害及经济损失。衣原体科的最新分类研究表明，衣原体科（Chlamydiaceae）分为衣原体属（Chlamydia）和嗜衣原体属（Chlamydophila），包括沙眼衣原体（Chlamydia trachomatis）、猪源衣原体(Chlamydia suis)、鼠沙眼衣原体（Chlamydia muridarum）、流产嗜衣原体(Chlamydophila abortus)、猫嗜衣原体(Chlamydophilafelis)、家畜嗜衣原体(Chlamydophila pecorum)、肺炎衣原体(Chlamydophila pneumoniae)和鹦鹉热衣原体(Chlamydophila psittaci)。感染动物的衣原体主要有6种：猪源衣原体、猫衣原体、家畜衣原体、肺炎衣原体和鹦鹉热衣原体。家畜衣原体属于嗜性衣原体属。目前已经从牛、绵羊、山羊、考拉和猪分离到该菌。考拉感染家畜衣原体后引起不育症和尿道疾病；其他动物感染后会引起流产、结膜炎、脑脊髓炎、肠炎、肺炎等疾病。家畜衣原体首次从间歇性脑脊髓炎病牛分离出来。C. pecorum常发现于健康小反刍动物如绵羊肠道（Clarkson M.J.等，1997），但有些分离株与结膜炎、关节炎和睾丸炎有关（Rodolakis A..等，1989；Storz J..等，1968）。猪C. pecorum感染引发肺炎、多发性关节炎、胸膜炎、心包炎和流产。沙眼衣原体和C. pecorum混合感染可能是猪衣原体流产的主要原因。由此可见家畜衣原体对养殖业有着很大的危害，对养殖业的发展造成极大的威胁。本发明就此研究开发了家畜衣原体TaqMan-MGB荧光定量PCR检测方法，这种方法能够快速准确的检测到家畜衣原体，在最短的时间内做出相应的对策。

 TaqMan探针是一种寡核苷酸探针，荧光基团链接在探针的5^，末端，淬灭基团则在3，端。当探针与靶序列配对时，荧光基团发射的荧光因与3^，端的淬灭基团接近而被淬灭。在进行延伸反应时，聚合酶的5^，外切酶活性将探针切断，使得荧光基团与淬灭基团分离，发射荧光。一分子的产物生成就会伴随着一分子的荧光信号的产生。随着扩增循环数的增加，释放出来的荧光基团不断的积累。因此TaqMan探针检测的是积累荧光。目前，水解探针已被用于基因检测、病毒定量、癌细胞基因微突变检测、细胞因子基因定量等，其结果都具有高特异性与高敏感性。

    TaqMan—MGB探针是近年来的一种新型探针，它的淬灭基团是一种非荧光的淬灭基团，本身不会发生荧光，这样就降低了PCR反应荧光本底信号的强度，进一步提高了其敏感性。

中国发明专利（申请号为：200710030435.0、200710030437.X、200710132320.2、200710026389.7、200810052321.0、200810015001.8、200810093986.6、200910041358.8、200910251055.9、200910090037.7、201010555073.9、201110339104.X等）分别公开了采用荧光定量PCR扩增技术检测病菌和动物疫病的方法。但是，目前尚无利用TaqMan-MGB探针荧光定量PCR扩增技术检测家畜衣原体(C. pecorum)的试剂盒及检测方法的报道。

发明内容

为克服现有技术的不足，本发明的第一个目的是提供一种家畜衣原体TaqMan-MGB探针实时荧光定量PCR检测用引物，第二个目的是提供使用该引物的家畜衣原体TaqMan-MGB探针实时荧光定量PCR检测用试剂盒，第三个目的是提供使用上述检测用引物的试剂盒的使用方法，用于对肉食品出入境进行检测。