[发明专利]外周血单核细胞基因组ＤＮＡ的提取方法

说明书

技术领域

本发明涉及生化实验领域，具体涉及外周血单核细胞基因组ＤＮＡ的提取方法。

背景技术

外周血是除骨髓之外的血液，临床上常用一些方法把骨髓中的造血干细胞释放到血外周血液中，再在从血液中提取分离得到造血干细胞，我们把这样得到的干细胞称为外周血干细胞 ，在二十一世纪初人类开始的生命方舟计划中首次提出外周血这一新概念，正常人外周血中一般看不见幼稚的干细胞的,只存在有极少量的造血干细胞，其含量为0.01%左右。如果幼稚细胞的比例大幅增加，有可能是类白血病。正因为存在0.01%的造血干细胞，可利用细胞分离的技术(血细胞自动分离机)，将外周血中含有造血干细胞的单个核细胞进行分离保存，重复数次达一定细胞数量后，回输给患者以之代替骨髓而进行的干细胞移植，称为外周血干细胞移植。

发明内容

本发明要解决的技术问题在于，针对现有技术缺陷，提供一种技术方案：

外周血单核细胞基因组ＤＮＡ的提取方法，其特征在于，步骤如下：首先，取目的淋巴细胞，其中注入所需缓冲液GA，震荡至彻底悬浮；加入PA，100毫升，高速离心振荡至少半分钟，然后在35摄氏度的环境下静置3-5分钟；加入蛋白酶，颠倒混匀，放置10分钟后，再次颠倒混匀，反复三到四次；加入缓冲液，吹打混匀；加入纯无水乙醇；注入离心管中，高速离心，去除沉淀物；将沉淀物吸附出来；沉淀物种加入漂洗也，然后弃上清；采用分光光度计即可进行测定ＲＮＡ纯度。

本发明中，在进行鉴定浓度之前，需要在先在零下十度的环境下放置三到五分钟。

本发明中，所述测定浓度之前，可以向其中央滴入三到四滴洗脱缓冲液。

本发明的有益效果是：操作简单，成本较低，为肿瘤免疫治疗提供新的思路、方法和途径，同时可以促进免疫杀伤作用。

具体实施方式

外周血单核细胞基因组ＤＮＡ的提取方法，其特征在于，步骤如下：首先，取目的淋巴细胞，其中注入所需缓冲液GA，震荡至彻底悬浮；加入PA，100毫升，高速离心振荡至少半分钟，然后在35摄氏度的环境下静置3-5分钟；加入蛋白酶，颠倒混匀，放置10分钟后，再次颠倒混匀，反复三到四次；加入缓冲液，吹打混匀；加入纯无水乙醇；注入离心管中，高速离心，去除沉淀物；将沉淀物吸附出来；沉淀物种加入漂洗也，然后弃上清；采用分光光度计即可进行测定ＲＮＡ纯度。在进行鉴定浓度之前，需要在先在零下十度的环境下放置三到五分钟，所述测定浓度之前，可以向其中央滴入三到四滴洗脱缓冲液。

以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明披露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。