[发明专利]一种对质粒ＤＮＡ进行有效纯化的简易方法

说明书

技术领域

本发明涉及生化实验领域，具体涉及一种对质粒ＤＮＡ进行有效纯化的简易方法。

背景技术

大量提取的质粒DNA一般需进一步纯化，常用柱层析法和氯化铯梯度离心法。常使用的所有纯化方法都利用了质粒DNA 相对较小及共价闭合环状这样两个性质。例如，用氯化铯－溴化乙锭梯度平衡离心分离质粒和染色体DNA 就取决于溴化乙锭与线状以及与闭环DNA分子的结合量有所不同。溴化乙锭通过嵌入碱基之间而与DNA结合，进而使双螺旋解旋。由此导致线状DNA的长度有所增加，作为补偿，将在闭环质粒DNA中引入超螺旋单位。最后，超螺旋度大为增加， 从而阻止了溴化乙锭分子的继续嵌入。但线状分子不受此限，可继续结合更多溴化乙锭，直至达到饱和( 每2个碱基对大约结合1个溴化乙锭分子) 。由于染料的结合量有所差别，线状和闭环DNA分子在含有饱和量溴化乙锭的氯化铯度中的浮力密度也有所不同。多年来，氯化铯－溴化乙锭梯度平衡离心已成为制备大量质粒DNA 的首选方法。然而该过程既昂贵又费时，为此发展了许多替代方法。其中主要包括利用离子交换层析、凝胶过滤层析、分级沉淀等分离质粒DNA和宿主DNA的方法。尽管这些方法大多数均被束之高阁，但其中最好的方法，也应是聚乙二醇分级沉淀法。

发明内容

本发明要解决的技术问题在于，针对现有技术缺陷，提供一种技术方案：

一种对质粒ＤＮＡ进行有效纯化的简易方法，步骤如下：首先，将需要进行纯化的质粒装至适当的试管中，加入5u;的溶解液消化ＲＮＡ，然后将其混合均匀，在５０摄氏度的环境下热浴１－１.５小时；用１.５倍提及的氯仿抽提蛋白；室温干燥；加二分之一的醋酸钠溶液和三分之一的醋酸钙溶液，摇晃；弃上清保留沉淀即可。

本发明中，所述氯仿中，可以混入等体积的酚 。

本发明中，最后弃上清的时候，使用四层纱布。

本发明的有益效果是：操作简单，成本较低，实验条件要求不高，可以用于反复性操作，获得预期效果。

具体实施方式

一种对质粒ＤＮＡ进行有效纯化的简易方法，步骤如下：首先，将需要进行纯化的质粒装至适当的试管中，加入5u;的溶解液消化ＲＮＡ，然后将其混合均匀，在５０摄氏度的环境下热浴１－１.５小时；用１.５倍提及的氯仿抽提蛋白；室温干燥；加二分之一的醋酸钠溶液和三分之一的醋酸钙溶液，摇晃；弃上清保留沉淀即可。所述氯仿中，可以混入等体积的酚。最后弃上清的时候，使用四层纱布。

以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明披露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。