[发明专利]用于混合样品中手性化合物对映体过量值直接测定的方法

说明书

技术领域

本发明涉及高效液相色谱和手性化合物的分析，具体地说是一种实现混合样品中手性药物对映体过量值的直接测定的二维高效液相色谱方法。

背景技术

在人体中作为生命活动重要基础的生物大分子，如蛋白质、多糖、核酸和酶等，几乎全是手性的，而手性药物要在人体中发挥药效，就必须与生物大分子作用。而含手性因素的化学药物的对映体在人体内的药理活性、代谢过程及毒性存在显著的差异：往往一个对映体能很好地与生物手性大分子相互作用从而发挥预期的药理作用，另一个对映体则往往不能很好地相互作用，不但本身没有药效，还会部分抵消药效，甚至还会产生有毒的代谢产物或引起严重的副作用。1992年美国食品与药物监管局(FDA)的药物评价与研发中心(CDER)颁布了手性药物指导原则，要求所有在美国上市的外消旋新药，其生产者均需说明药物中所含的对映体各自的药理作用、毒性和临床效果，并且当两种异构体有明显的药效和毒理作用差异时，必须以单一异构体的药品形式上市。欧共体国家及日本、加拿大等国随后也制订了类似的法规。

因此，单一构型的药物对于医药研发极为重要，从而大大促进了不对称合成的发展。而在不对称合成中，最为重要的就是不对称合成产物中目标手性药物的对映体过量值的测定，因此迫切需要寻找高通量快速测定对映体过量值的方法，以缩短不对称合成中不对称催化剂的筛选时间及不对称药物的研发周期，促进不对称合成的发展。现有的测定方法是将复杂混合样品溶液预处理后，再进行一维高效液相色谱分析，步骤一般包括：首先通过传统的柱层析色谱进行分离纯化，去除反应物、副产物、中间产物、溶剂、催化剂等杂质，再将纯化后的待测样品进行高效液相色谱、气相色谱等常规对映体过量值的测定。该测定对映体过量值的传统方法步骤繁琐耗时，且耗费的溶剂量大、对环境影响较大。

对比常规测定所采用的一维高效液相色谱，在线二维色谱技术具有高效、准确、快速等优点，在中草药成分分析、复杂样品的分析检测等方面应用广泛。同时由于可以实现从混合溶液到色谱分析一步式对映体过量值的测定，在线二维色谱测定方法具有更高的准确性。因此利用在线二维色谱技术用于混合样品中手性药物对映体过量值的测定能够大大提高不对称合成的效率，缩短手性新药的研发周期。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种操作简单、高通量快速测定的用于混合样品中手性化合物对映体过量值直接测定的方法。

为了解决上述技术问题，本发明提供的用于混合样品中手性化合物对映体过量值直接测定的方法，包括第一维色谱单元、第二维色谱单元和两个十通阀，所述的第一维色谱单元包括第一维输液泵、第一维色谱柱、自动进样器及DAD检测器；所述的第二维色谱单元包括第二维输液泵、第二维色谱柱；定量环以及两个十通阀作为第一维液相和第二维液相的转换接口，其中：第一维色谱柱的进口端及出口端分别与自动进样器及第一十通阀的1号接口相连，自动进样器与第一维输液泵连接；第二维色谱柱的进口端及出口端分别与第一十通阀的5号接口及9号接口相连；定量环的两端接口分别与第二十通阀的9号和6号接口相连；DAD检测器与第二十通阀的7号接口相连；第二维输液泵与第一十通阀的4号接口相连；第一十通阀的2号接口与废液缸相连；第一十通阀的10号接口与第二十通阀的8号接口相连；第一十通阀的3号接口与第二十通阀的10号接口相连；第一十通阀的6号接口与第二十通阀的5号接口相连；所述的第一十通阀和第二十通阀的其他接口无连接；在线测定步骤如下：

（1）将第一维色谱柱及第二维色谱柱安装于高效液相色谱仪上；

（2）将需测定对映体过量值的混合溶液加入至色谱进样瓶中；

（3）通过自动进样器进样，此时第一十通阀位置为10-1即10号接口与1号接口连通，第二十通阀位置为1-2即1号接口与2号接口连通；

（4）待极性较小的杂质经过DAD检测器，而待检测的手性对映体即将从第一维色谱柱上洗脱下来时，第一十通阀位置保持为10-1，第二十通阀位置切换至10-1，此时待检测的手性对映体被收集至定量环中；

（5）当待检测的手性对映体已完全从第一维色谱柱上洗脱下来并进入定量环后，第一十通阀位置保持为10-1，第二十通阀位置切换至1-2，继续第一维分离，将极性较大的杂质从第一维色谱柱上洗脱下来；