[发明专利]一种从猪小肠中提取肝素钠的方法

说明书

技术领域

本发明属于化工领域，涉及一种肝素钠的提取方法，具体涉及一种从猪小肠中提取肝素钠的方法。

背景技术

肝素主要从牛肺或猪小肠黏膜提取，是一种由葡萄糖胺、L-艾杜糖醛苷、N-乙酰葡萄糖胺和D-葡萄糖醛酸交替组成的黏多糖硫酸脂。肝素通过与抗凝血酶Ⅲ结合使其暴露精氨酸反应中心，与活化的凝血因子结合使其灭活，主要灭活Ⅹa和Ⅱa因子。肝素主要用于预防和治疗血栓栓塞性疾病，如心肌梗塞、肺栓塞、脑血管栓塞、外周静脉血栓等，可防止血栓的形成和扩大。还可用于DIC的早期及其它体内外的抗凝。

目前，肝素钠主要是从猪、羊小肠黏膜和牛肺、腌肠衣盐水等中提取。其提取方法最常用的是盐解或酶解-离子交换-乙醇沉淀法，但这两种方法普遍存在回收率低、纯度不高的问题。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种设计合理、方法可靠的从猪小肠中提取肝素钠的方法。

为解决以上技术问题，本发明一种从猪小肠中提取肝素钠的方法，包括如下步骤：

（1）吸附：

称取猪小肠黏膜置反应锅中，加水稀释，用30％氢氧化钠溶液调节pH值至9.0～9.5，加热至沸，保持10～15min，降温至35℃～45℃，同时滤液虹吸至反应池中，加入5～10％树脂，保温搅拌吸附8～10h；

（2）洗涤：

取步骤（1）吸附后的液体静置30min后过滤，收集树脂，并用水将树脂漂洗干净，沥干备用；

（3）洗脱：

取步骤（2）的固体加入0.8～1.5mol/L氯化钠洗涤1～3h，沥干后，加入3～5mol/L氯化钠1～3倍量，搅拌洗脱5h，沥干后再洗脱2次，合并全部洗脱液；

（4）分离：

将步骤（3）的洗脱液在搅拌的情况下使用聚丙烯腈膜进行分离，滤速保持在30～40ml/min，并使膜上部分占总体积的10～20％时，停止抽滤；

（5）除蛋白质：

取膜上截留部分，加入DC-W，充分搅拌20min，室温下静置5h，滤除沉淀；

（6）沉淀：

取步骤（5）的滤液，加入1～2倍的95％乙醇，充分搅拌后，静置过夜，虹吸上层醇液，沉淀分别用95％乙醇、丙酮脱水2次，真空干燥，得肝素钠精品。

作为本发明的改进，步骤（1）中所述树脂为D204树脂。

上述步骤（3）中洗脱2次时，每次加入3～5mol/L氯化钠溶液量减半，洗脱时间分别为2h、1h。

上述步骤（4）的聚丙烯腈膜为截留Mr3000～4000的聚丙烯腈膜。

与现有技术相比，本发明具有的有益效果为：

本发明提供的制备方法以来源广泛的猪小肠黏膜为原料，成本低廉。本发明使用聚丙烯腈膜进行分离，不仅可节约大量乙醇，降低生产成本，而且制备的肝素钠精品纯度高，保证了肝素的活性。

具体实施方式

为便于理解本发明，本发明列举实施例如下。本领域技术人员应该明了，所述实施例仅仅用于帮助理解本发明，不应视为对本发明的具体限制。

如无具体说明，本发明的各种原料均可以通过市售得到；或根据本领域的常规方法制备得到。除非另有定义或说明，本文中所使用的所有专业与科学用语与本领域技术熟练入员所熟悉的意义相同。此外任何与所记载内容相似或均等的方法及材料皆可应用于本发明方法中。

除非另有定义或说明，本文中所使用的所有专业与科学用语与本领域技术熟练人员所熟悉的意义相同。此外任何与所记载内容相似或均等的方法及材料皆可应用于本发明方法中。

实施例1

一种从猪小肠中提取肝素钠的方法，包括如下步骤：

（1）吸附：

称取猪小肠黏膜500kg置反应锅中，加水稀释，用30％氢氧化钠溶液调节pH值至9.0～9.5，加热至沸，保持15min，降温至35℃，同时滤液虹吸至反应池中，加入10％D204树脂树脂，保温搅拌吸附10h；

（2）洗涤：

取步骤（1）吸附后的液体静置30min后过滤，收集树脂，并用水将树脂漂洗干净，沥干备用；

（3）洗脱：

取步骤（2）的固体加入1mol/L氯化钠洗涤1～3h，沥干后，加入4mol/L氯化钠1～3倍量，搅拌洗脱5h，沥干后再洗脱2次，每次加入4mol/L氯化钠溶液量减半，洗脱时间分别为2h、1h，合并全部洗脱液。

（4）分离：