[发明专利]一种高密度培养小克银汉发酵生产GLA的方法

权利要求书

1.一种高密度培养小克银汉发酵生产GLA的方法，其特征在于步骤如下：

第一步，按照保藏甘油菌种∶摇瓶活化培养基为1∶25体积比例将小克银汉菌种接种于装有活化培养基的一级摇瓶中，在20-25℃摇床中以120-170rpm转速活化培养24-48h；

第二步，按照5-10%的体积百分比接种量将小克银汉活化菌种转接到二级摇瓶中，在20-25℃摇床中以120-170rpm转速扩大培养24-48h；

第三步，按照5-10%的体积百分比接种量将扩大培养的小克银汉菌种接种于种子罐中，整个发酵过程中采用28-30%的氨水控制pH5.5-6.0之间，培养温度20-25℃，通气量8-10m³/h，溶氧控制在30-50%之间，培养24-48h，直到生物量达到20-25g/L；

第四步，再按照5-10%的体积百分比接种量将种子罐中扩大培养的小克银汉菌种接种于发酵罐中发酵培养144-168h，整个发酵过程中采用28-30%的氨水控制在pH5.5-6.0之间，培养温度20-25℃，通气量20-25m³/h，溶氧控制在30-50%之间，通过流加葡萄糖控制葡萄糖浓度在5-10g/L之间，待结束发酵后，测得发酵液中菌丝干重达到60-80g/L，油脂含量达到20-25g/L，GLA含量达到4.8-6.1g/L。

2.如权利要求1所述的一种高密度培养小克银汉发酵生产GLA的方法，其特征在于：上述摇瓶活化培养基配方为：葡萄糖50-100g/L，KH₂PO₄ 2-5 g/L，MgSO₄·7H₂O 0.5-3g/L。

3.如权利要求1所述的一种高密度培养小克银汉发酵生产GLA的方法，其特征在于：上述摇瓶扩大培养的培养基配方为：葡萄糖50-100g/L，KH₂PO₄ 2-5 g/L，MgSO₄·7H₂O 0.5-3g/L。

4.如权利要求1所述的一种高密度培养小克银汉发酵生产GLA的方法，其特征在于：上述种子发酵罐的培养基配方为：葡萄糖30-100g/L，KH₂PO₄ 3-8g/L，MgSO₄·7H₂O 1-4g/L，酵母膏10-20g/L，NaNO₃ 1-5g/L。

5.如权利要求1所述的一种高密度培养小克银汉发酵生产GLA的方法，其特征在于：上述大发酵罐的培养基配方为：葡萄糖30-100g/L，KH₂PO₄ 3-8g/L，MgSO₄·7H₂O 1-4g/L，酵母膏10-20g/L；NaNO₃ 1-5g/L。

6.如权利要求1所述的一种高密度培养小克银汉发酵生产GLA的方法，其特征在于：上述小克银汉发酵培养温度为20-25℃。

7.如权利要求1所述的一种高密度培养小克银汉发酵生产GLA的方法，其特征在于：上述小克银汉发酵培养pH为5.5-6.0。