[发明专利]一种能够有效筛选shRNA片段的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种生化实验方法，具体来说，是指一种能够有效筛选shRNA片段的方法。 

背景技术

菌落PCR（Colony PCR）可不必提取基因组DNA，不必酶切鉴定，而是直接以菌体热解后暴露的DNA为模板进行PCR扩增，省时少力。建议使用载体上的通用引物。通常利用此方法进行重组体的筛选或者DNA测序分析。最后的PCR产物大小是载体通用引物之间的插入片断大小。菌落PCR与我们通常的普通DNA的PCR的不同在于，直接以单个菌作为模板。是一种可以快速鉴定菌落是否为含目的质粒的阳性菌落。操作简单，快捷，阳性率较高，在转化鉴定中较常见。设计引物很关键。一般如果是定向克隆，用载体上的通用引物即可；如pET系列可用T7通用引物。如果是非定向克隆（如单酶切或平末端连接），一条引物用载体，一条引物用目的基因上的，这样就可以比较方便的鉴定了，而且错误概率很低。PCR条件的选择接近最佳，同时挑取的菌体不宜太多，否则会有非特异性扩增。使用的引物浓度不能太高，浓度过高会导致非特异性扩增，反应的循环数也不能太多，一般不超过25个。同时因为扩增的片段的GC含量问题，有的GC含量很低，有的又很高，导致菌落PCR不容易扩增出目的条带，在此建议在设置PCR程序时以高GC的温度为上限，每一循环降0.2度左右。 

发明内容

为克服上述技术问题，我们提出了以下技术方案： 

一种能够有效筛选shRNA片段的方法，步骤如下：首先选择事情设计好的目标shＲＮＡ，将其连接与目标载体中；将需要重组的质粒载体转染至sh RNA中；组件中采用多重比较法进行比较，当其转染上细菌后，选择最有效的基因沉默；再与其他实验组进行比对，对于最有效的干扰质粒，即为需要选择的sh RNA片段。

本发明中，重组蛋白的时候，滴入含有安卡青霉素的溶液，浓度百分比至少为15%。 

本发明中，表达绿色荧光蛋白的重组质粒24小时内可以在荧光显微镜下进行筛选。 

本发明的有益效果是，可以有效鉴定PCR，同时效果明显，表达清楚、稳定，为下一步能够成功建立模型奠定坚实基础。 

具体实施方式

一种能够有效筛选shRNA片段的方法，步骤如下：首先选择事情设计好的目标shＲＮＡ，将其连接与目标载体中；将需要重组的质粒载体转染至sh RNA中；组件中采用多重比较法进行比较，当其转染上细菌后，选择最有效的基因沉默；再与其他实验组进行比对，对于最有效的干扰质粒，即为需要选择的sh RNA片段。本发明中，重组蛋白的时候，滴入含有安卡青霉素的溶液，浓度百分比为15%；表达绿色荧光蛋白的重组质粒24小时内可以在荧光显微镜下进行筛选。 

以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明披露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。