[发明专利]一种对shRNA干扰片段进行筛选的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种实验方法，具体来说，一种对shRNA干扰片段进行筛选的方法。 

背景技术

核糖核酸（英语：Ribonucleic acid，缩写：RNA）是一种重要的生物大分子，因为分子由核糖核苷酸组成而得名。每个RNA分子都由核苷酸单元长链组成，每个核苷酸单元含有一个含氮碱基、一个核糖和一个磷酸基。RNA是具有细胞结构的生物的遗传讯息中间载体，并参与蛋白质合成；还参与基因表达调控。对一部分病毒而言，RNA是其唯一的遗传物质。RNA存在于一切细胞的细胞质和细胞核中，也存在于大多数已知的植物病毒和部分动物病毒以及一些噬菌体中。嘧啶碱有一个不同：RNA是尿嘧啶，DNA则为胸腺嘧啶。 五碳糖不同：RNA是核糖，DNA是脱氧核糖，这样一来组成RNA的基本单位就是核糖核苷酸；DNA则为脱氧核苷酸DNA为双链结构，RNA为单链结构。 

发明内容

为克服上述技术问题，我们提出了以下技术方案： 

一种对shRNA干扰片段进行筛选的方法，步骤如下：首先建立能够稳定表达PERV的细胞模型；然后对细胞进行培养，shRNA表达载体转染细胞，并进行荧光观察；用荧光定量进行检测。

本发明中，在对PERV进行培养的时候，需要及时吸取干净细胞培养液，之后再用洗脱缓冲液进行预热3-10分钟。 

本发明中，其特征在于，最后需要在48小时后用荧光显微镜观察细胞转染效率并收集细胞检测shRNA的干扰效果。 

 本发明的有益效果是，菌块能够彻底混匀，裂解效果良好，提取量和纯度都比较高，操作简便，成本不高。 

具体实施方式

一种对shRNA干扰片段进行筛选的方法，步骤如下：首先建立能够稳定表达PERV的细胞模型；然后对细胞进行培养，shRNA表达载体转染细胞，并进行荧光观察；用荧光定量进行检测。在对PERV进行培养的时候，需要及时吸取干净细胞培养液，之后再用洗脱缓冲液进行预热7分钟，最后需要在48小时后用荧光显微镜观察细胞转染效率并收集细胞检测shRNA的干扰效果。 

 以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明披露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。