[发明专利]一种检测基因突变的引物及其应用

权利要求书

1.一种检测基因突变的引物，其特征在于：该引物包括如下三部分：

1)锚定序列：该序列位于引物5’-端，与靶序列有大于14个碱基配对；

2)嘌呤环：引物3’-端起第5～8个碱基位置插入有3个脱氧次黄嘌呤核苷，与靶序列的同等位置上有“1”个碱基或“0”个碱基对位，形成“3:0”或“3:1”的泡状嘌呤环；

3)检测序列：位于引物3’-末端由5～8个碱基组成的基因突变检测序列；

所述引物具有22～30个碱基，引物与靶序列结合的Tm值为40～65℃；检测序列与靶序列结合的碱基个数为5～8；检测序列与靶序列结合的Tm值为10～20℃；检测基因突变的碱基放置在所述检测序列3’-末端起第“1”、“2”、“3”或“4”个碱基位置。

2.根据权利要求1所述的检测基因突变的引物，其特征在于：所述检测基因突变的碱基放置在所述检测序列3’-末端起第“3”个碱基位置。

3.根据权利要求1所述的检测基因突变的引物，其特征在于：所述检测序列与靶序列结合的碱基个数为6～7。

4.根据权利要求1所述的检测基因突变的引物的应用，其特征在于：将引物与其他的信号系统组合形成新的基因突变检测体系，应用于核酸检测技术检测基因突变、核酸检测技术检测单核苷酸多态性、多重PCR和基因芯片的扩增，对这些核酸的扩增包括恒温扩增和变温扩增两种。

5.根据权利要求4所述的检测基因突变的引物的应用，其特征在于：所述变温扩增方法，具有以下步骤：

1)初始变性2～10分钟；

2)富集突变：需要2～10个循环来富集单核苷酸多态性和基因突变，包括变性、退火、延伸；

3)突变检测：30～35个循环的检测过程，包括变性、退火、延伸过程；

所述退火温度Tm均为50～65℃。