[发明专利]同时检测胱抑素C和中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白的检测装置及检测方法

说明书

技术领域

本发明专利是涉及医学临床诊断技术领域，特别是涉及一种以免疫胶体金快速检测方法制备的同时检测胱抑素C和中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白的检测装置及检测方法。

背景技术

胱抑素C(Cys C)1983首次被发现。是一种半胱氨酸蛋白酶抑制剂，广泛存在于各种组织的有核细胞和体液中，是一种低分子量、碱性非糖化蛋白质，分子量为13.3KD，由122个氨基酸残基组成。Cys C可由机体所有有核细胞产生，产生率恒定。循环中的CysC仅经肾小球滤过而被清除，是一种反映肾小球滤过率变化的内源性标志物，在近曲小管重吸收，但重吸收后被完全代谢分解，不返回血液，因此，其血中浓度由肾小球滤过决定，而不依赖任何外来因素，如性别、年龄、饮食的影响，是一种反映肾小球滤过率变化的理想同源性标志物。

临床评价肾脏疾病进展和严重程度，一般以肾功能为参考，肾功能一般以肾小球滤过率(GFR)反映。它是反映肾功能最重要的指标。内生肌酐清除率一直被认为是反映GFR较好的指标，但也存在很多不足之处。Cys C是迄今基本满足理想内源性GFR标志物要求的内源性物质。是新近发展起来的评估肾功能的一种敏感性好、特异性高的指标。

NGAL是脂质运载蛋白家族的新成员，是1993年在人中性粒细胞中被发现的，NGAL与明胶酶B，即MMP-9的功能密切相关。机体在生理状态下，NGAL除了在中性粒细胞表达外，还在其他一些组织细胞中也有表达，如小肠潘氏细胞、肝胆管细胞、肾近曲小管细胞、胃壁细胞等。但是在受损的上皮细胞中表达显著上升。大量研究证明，肾脏在诱导的肾脏急性损伤后约2h就能在尿中检测到NGAL，而检测出血肌酐明显改变要在等到3-4d后，同样在肾脏急性缺血再灌注损伤后3h在尿中也能检测到NGAL。儿童心脏手术后发生急性肾功能衰竭的患者在手术后2h血、尿NGAL的浓度明显升高，而血肌酐明显升高则要等到1-3d后。NGAL不仅存在于尿液中，同样也存在于血浆中，已有实验证明血浆中NGAL的浓度正常值为低于200ng／mL。血浆中NGAL浓度的测定对AKI的早期诊断将更加有利，因为它既能避免因极度少尿带来的麻烦，又能减轻因治疗而使用利尿药等带来的干扰。

Cys C和NGAL是新近发现的两个性能良好的肾功能良好的生物标志物，特别是在急性或肾功能损伤早期就有明显的变化，因而受到临床检测人员的欢迎，如果将两种标志物同时检测，则能更准确全面地反映肾功能性能。目前这两个标志物单独的检测试剂在市场上已有出现，但尚无采用免疫胶体金方法同时检测胱抑素C和中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白的检测装置出现。

发明内容

本发明目的是提供一种同时检测胱抑素C和中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白的检测装置及检测方法，用来检测血清、血浆、全血或尿液样本中的CYS C和NGAL。具有操作简便、反应快速、结果准确、可信、适合现场检测等优点。发明内容如下：

一种同时检测胱抑素C和中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白的检测装置及检测方法，其特征在于装置由相互独立的胱抑素C(CYS C)和中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)检测试纸、双联卡壳、样本稀释液和内置了相应标准曲线和判定方法的免疫层析结果判读记录仪组成。

所述的检测装置，其特征在于CYS C检测试剂试纸由含有胶体金标记的抗人CYS C抗体的胶体金垫、包被有配对CYS C抗体(T线)和抗鼠IgG(C线)的NC膜、样品垫、吸样垫和塑料底板组成。NGAL检测试剂试纸由含有胶体金标记的抗人NGAL抗体的胶体金垫、包被有配对NGAL抗体(T线)和抗鼠IgG(C线)的NC膜、样品垫、吸样垫和塑料底板组成。试纸宽度为3-5mm，长度为7-8cm。样品垫、胶体金垫、NC膜和吸样垫从塑料底板一端依次排列至另一端。

所述的检测装置，其特征在于双联卡壳包含上盖和下盖两个部分，内部可平行放置两条检测试纸。卡壳上盖的下部对应样品垫部分设置了样品孔，用于加入样本，卡壳上盖的中间部分应对试纸NC膜中部设置了视窗口，用于观察NC膜上的C、T线，判定结果。样本稀释液为0.01M pH7.4的磷酸盐缓冲液。

所述的检测装置，其特征在于所述NC膜是一种由硝酸纤维素构成的多孔结构的膜，孔径为8-12um。稀释液垫为玻璃纤维膜或无纺布，吸样垫为吸水滤纸。