[发明专利]一种固液相片段缩合制备胸腺肽α1的方法

权利要求书

1.一种固液相片段缩合制备胸腺肽α1的方法，包括以下工艺步骤：

（1）将结构为Fmoc-KEKKEVVEEAEN-Y的侧链保护肽的氨基端去保护，得NH₂-KEKKEVVEEAEN-Y；

（2）采用液相片段缩合方法使结构为NH₂-KEKKEVVEEAEN-Y的侧链保护肽与结构为Fmoc-EITTKDL-COOH的侧链保护肽缩合，得到结构为Fmoc-EITTKDLKEKKEVVEEAEN-Y的羧基保护的侧链保护肽；再脱去氨基Fmoc保护，得肽NH₂-EITTKDLKEKKEVVEEAEN-Y；

（3）采用液相片段缩合方法将肽NH₂-EITTKDLKEKKEVVEEAEN-Y与结构为Fmoc-SDAAVDTSS-COOH的侧链保护肽缩合，产生结构为Fmoc-SDAAVDTSSEITTKDLKEKKEVVEEAEN-Y羧基保护的侧链保护肽，然后脱去氨基端Fmoc保护，并将氨基末端乙酰化，产生结构为Ac-SDAAVDTSSEITTKDLKEKKEVVEEAEN-Y羧基保护的侧链保护肽；

或采用液相片段缩合方法将肽NH₂-EITTKDLKEKKEVVEEAEN-Y与结构为Ac-SDAAVDTSS-COOH的侧链保护肽反应，产生结构为Ac-SDAAVDTSSEITTKDLKEKKEVVEEAEN-Y羧基保护的侧链保护肽；

（4）将肽Ac-SDAAVDTSSEITTKDLKEKKEVVEEAEN-Y侧链保护肽的侧链和羧基去保护，得目标肽Ac-SDAAVDTSSEITTKDLKEKKEVVEEAEN-COOH；

上述Y为叔丁酯基、苄酯基、对硝基苄酯基或三苯甲基。

2.如权利要求1所述固液相片段缩合制备胸腺肽α1的方法，其特征在于：结构为Fmoc-KEKKEVVEEAEN-Y的侧链保护肽用以下方法合成：

（1）将结构为Fmoc-EAEN-COOH的侧链保护肽羧基端保护，得到结构为Fmoc-EAEN-Y的侧链保护肽；并将肽氨基端去保护，得结构为NH₂-EAEN-Y的侧链保护肽；

（2）采用液相片段缩合方法，使肽NH₂-EAEN-Y与结构为Fmoc-EVVE-COOH的侧链保护肽反应，产生结构Fmoc-EVVEEAEN-Y的羧基保护的侧链保护肽；并对该肽氨基脱保护，得结构为NH₂-EVVEEAEN-Y的肽片段；

（3）采用液相片段缩合方法，使肽NH₂-EVVEEAEN-Y与结构为Fmoc-KEKK-COOH的侧链保护肽反应，获得结构为Fmoc-KEKKEVVEEAEN-Y的侧链保护肽；

上述Y为叔丁酯基、苄酯基、对硝基苄酯基或三苯甲基。

3.如权利要求1所述固液相片段缩合制备胸腺肽α1的方法，其特征在于：结构为Fmoc-KEKKEVVEEAEN-Y的侧链保护肽用以下方法合成：

（1）将结构为Fmoc-EVVEEAEN-COOH侧链保护肽羧基端进行保护，得到结构为Fmoc-EVVEEAEN-Y的侧链保护肽片段，并使该肽片段的氨基端去保护，得到结构为NH₂-EVVEEAEN-Y的侧链保护肽；

（2）采用液相片段缩合方法，将侧链保护肽NH₂-EVVEEAEN-Y与结构为Fmoc-KEKK-COOH的侧链保护肽反应，得结构为Fmoc-KEKKEVVEEAEN-Y的羧基保护的侧链保护肽；

上述Y为叔丁酯基、苄酯基、对硝基苄酯基或三苯甲基。

4.如权利要求3所述固液相片段缩合制备胸腺肽α1的方法，其特征在于步骤（1）中的Fmoc-EVVEEAEN-COOH侧链保护肽用固相片段缩合工艺合成：将Fmoc-EVVE-COOH侧链保护肽在固相体系中以1.5eq缩合于肽树脂NH₂-EAEN-resin上，进而裂解肽树脂得到Fmoc- EVVEEAEN-COOH侧链保护肽。