[发明专利]一种等位基因特异性甲基化中筛选杂合子的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种生化的检测方法，具体来说，是指一种等位基因特异性甲基化中筛选杂合子的方法。 

背景技术

DNA甲基化（DNA methylation）是最重要的表观遗传学修饰方式之一，与肿瘤发生密切相关。抑癌基因启动区甲基化可以阻碍转录因子与启动子结合，导致基因转录失活，合成成熟功能蛋白受阻进而导致细胞增殖失控。有关抑癌基因甲基化失活的研究在临床肿瘤早期诊断，治疗以及预后判断方面具有重要指导意义，是目前的一个研究热点。 

我们前期曾对辽南高发区胃癌的多位点甲基化情况进行了检测，结果发现此地区胃癌患者P16、hMLH1、TIMP3、DKK3、RASSF1A以及CDH1等特定基因启动子区DNA甲基化频率和程度都明显增高[1]，但同时我们发现基因启动子区异常高甲基化与基因表达沉默并非完全相关，国外也有越来越多的研究者发现并提出了这个问题。 

发明内容

为克服上述技术问题，我们提出了以下技术方案： 

一种等位基因特异性甲基化中筛选杂合子的方法，首先在TIMP3基因启动子区和第一外显子区寻找全部CCGG序列和SNP位点，然后结合等位基因特异性PCR技术和甲基化敏感性限制性酶切—PCR法，对TIMP3的一对等位基因启动子区CpG岛的甲基化状态进行特异性检测，在DNA水平应用AS-PCR技术在组织标本中筛选该位点杂合子。

本发明中，在DNA水平应用AS-PCR技术在细胞系中筛选该位点杂合子。 

本发明中，如果两个pcr反应均有产物，则该样本为SNP杂合子。 

本发明的有益效果是，可以有效阻碍转录因子与启动子结合，导致转录失活，合成成熟功能蛋白受阻而导致细胞增殖失控。 

具体实施方式

一种等位基因特异性甲基化中筛选杂合子的方法。首先在TIMP3基因启动子区和第一外显子区寻找全部CCGG序列和SNP位点，然后结合等位基因特异性PCR技术和甲基化敏感性限制性酶切—PCR法，对TIMP3的一对等位基因启动子区CpG岛的甲基化状态进行特异性检测，在DNA水平应用AS-PCR技术在组织标本中筛选该位点杂合子；在DNA水平应用AS-PCR技术在细胞系中筛选该位点杂合子；如果两个pcr反应均有产物，则该样本为SNP杂合子。 

以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明披露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。