[发明专利]一种溶菌酶联合超声波清洗仪破碎法测定革兰氏阳性细菌胞内铬价态的方法

权利要求书

1.一种溶菌酶联合超声波清洗仪测定革兰氏阳性细菌胞内的铬价态的方法，包括如下步骤：

1）将革兰氏阳性细菌在含铬的NA（Nutrient Agar）培养基中培养后，取出离心，取上清测定六价铬和总铬的浓度，作为细胞外的铬浓度；不加菌的作为对照组，测得的总铬浓度即为初始总铬浓度；

2）取菌液沉淀先后经过溶菌酶处理和超声波清洗仪处理，离心后取上清液，分别测定其中的六价铬和总铬的浓度，作为细胞内的铬浓度。

2.如权利要求1所述的方法，其中所述革兰氏阳性细菌选自葡萄球菌(Staphylococcus)、链球菌(Streptococcus)、肺炎双球菌(Pneumococcus)、炭疽杆菌(Bacillus anthraci)、白喉杆菌(Corynebacterium diphtheriae)、破伤风杆菌(Clostridium tetani)、蜡样芽胞杆菌(Bacillus cereus)。

3.如权利要求1或2所述的方法，其中所述NA培养基由蛋白胨、牛肉膏、NaCl、纯净水、琼脂配制而成，其pH=7.0。

4.如权利要求4所述方法，其中NA培养基由蛋白胨10g、牛肉膏3g、NaCl5g、纯净水1000mL、琼脂25g配制而成。

5.如权利要求1或2所述的方法，所述溶菌酶处理是将菌液沉淀加入离心管中，并加入溶菌酶溶液，水浴保温；所述溶菌酶溶液是将溶菌酶溶于纯水中制备得到，其浓度为1-10mg/ml，更优选为4-10mg/ml；所述水浴温度为37℃，保温时间为10-30min。

6.如权利要求1或2所述的方法，所述超声波清洗仪处理中超声波清洗仪的破碎功率为50-75%，破碎处理时间为30-60min。

7.如权利要求1或2所述的方法，所述溶菌酶处理优选溶菌酶浓度4mg/mL、溶菌酶处理时间15min；超声波清洗仪处理优选超声波破碎功率70%、超声波处理时间45min。