[发明专利]一种以红松籽粕为原料制备免疫活性肽的方法

说明书

技术领域

本发明属于农产品精深加工及其副产物综合利用的技术领域，涉及一种以红松籽粕为原料制备免疫活性肽的方法，获得分子量为3000～10000Da、蛋白质含量为92.0%～96.0%、含水量2.0%～4.0%、灰分为0.5%～1.5%，淋巴细胞转化值为0.40～0.60、NK细胞活性为45%～65%的红松籽粕免疫活性肽。

背景技术

我国红松籽生产历史悠久，是出口红松籽的主要国家，长白山是红松籽的主产区，具有得天独厚的红松籽资源优势，红松籽种仁大，产量高，因其生长于无污染的自然环境中，大都属于有机或绿色食品，品质也久富盛名。但是，我国的红松籽生产，目前仍处于采集野生资源的阶段，产品初加工多，产品开发程度低。所以，如何发挥长白山天然资源优势，提高红松籽精深加工产品的科技含量，用以创造最大经济效益具有十分重要的意义。

红松籽蛋白是一种良好的食源性功能肽来源。经研究发现，红松籽蛋白中含有19种氨基酸，分别是异亮氨酸、亮氨酸、赖氨酸、蛋氨酸、谷氨酰胺、半胱氨酸、门冬酰胺、酪氨酸、苯丙氨酸、苏氨酸、精氨酸、缬氨酸、组氨酸、门冬氨酸、丙氨酸、谷氨酸、脯氨酸、甘氨酸和丝氨酸，其中，含有8种人体必需氨基酸。将这19种氨基酸的含量与WHO(国际卫生组织)和FAO(联合国粮农组织)氨基酸人体必需量的标准值对比，得出红松籽蛋白的氨基酸含量与国际规定标准十分接近，其中异亮氨酸、苯丙氨酸的含量均高于国际标准。此外，谷氨酸、天冬氨酸和精氨酸含量也较高，它们对人体的生理作用有着重要功能。

目前，国内外的研究热点主要集中于红松籽油脂的功能活性，开发红松籽饮料产品，而对于红松籽粕活性肽的研究与开发鲜有报道。且在红松籽油脂提取过程中，副产物多数被当作废弃物处理，因此，研究红松籽粕活性肽，对于提高红松籽产品附加值，开发红松籽粕活性肽系列功能性食品，创造经济收益意义重大。

免疫活性肽是指一类存在于生物体内具有免疫功能的活性肽，这种肽在体内一般含量较低，结构多样，是一种细胞信号传递物质。免疫活性肽的研究始于1981年，Jolles等首次用用胰蛋白酶水解人乳蛋白，能增强小鼠腹腔巨嗜细胞对绵羊红细胞的吞噬作用。目前，已有的报道中表明，不同生物学功能的免疫活性肽，如抗血栓转化酶抑制肽、酪蛋白磷酸肽、抗菌肽等，能够刺激机体淋巴细胞的增殖，增强巨嗜细胞的吞噬功能，但既有研究中，未见过采用天然优质红松籽粕进行免疫活性肽相关研究。因此，以红松籽粕为基础，分离制备免疫活性肽，进而评价其体内相关免疫活性，对食物蛋白来源免疫活性肽的相关研究意义重大，同时为提高红松籽产品附加值，开发辅助提高免疫力产品，奠定了研究基础，并产生了深远影响。

本申请发明专利的技术优势分析

第一，本专利所采用的原料来源广泛、天然、无污染，易获取，成本低。红松籽粕源于长白山红松籽冷压榨法榨油后产生的副产物，其特征在于未接触任何有机提取溶剂，保存了长白山红松籽蛋白的原有的品质及功能。

第二，本发明采用复合酶可控酶解技术，膜分离技术方便有效地分离出一种红松籽粕免疫活性肽，并使用淋巴细胞转化及NK细胞活性测定进行免疫活性评价；

（1）本发明使用复合酶对红松籽粕进行酶解，获得了红松籽粕酶解液，实现了对红松籽优质蛋白资源的有效增值利用；

（2）采用膜分离技术方便有效地分离出一种3000～10000Da、蛋白质含量为92.0%～96.0%、含水量2.0%～4.0%、灰分为0.5%～1.5%，淋巴细胞转化值为0.40～0.60、NK细胞活性为45%～65%的红松籽粕免疫活性肽；

（3）本专利采用淋巴细胞转化法作为一种红松籽粕免疫活性肽的衡量指标，经测定，淋巴细胞转化值为0.40～0.60；

（4）本专利采用NK细胞活性测定法作为一种红松籽粕免疫活性肽的衡量指标，以YAC-1为细胞模型，以受试小鼠脾细胞为效应细胞，经测定，NK细胞活性为45%～65%。

发明内容

本发明需要解决的技术问题：公开一种以红松籽粕为原料制备免疫活性肽的方法，是以红松籽粕为原料，经过原料预处理、复合酶可控酶解、膜分离、减压浓缩、真空冷冻干燥过程，获得分子量为3000～10000Da的红松籽粕免疫活性肽。

本发明的技术方案：